[发明专利]获得并检测待鉴定对象之标志物的方法、相关标志物、认证方法以及验证方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别地涉及分子生物学并且涉及获得标志物的方法，所述标志物用于鉴定包含至少一个DNA片段且优选多个多态性DNA片段(例如微卫星(STR)或单核苷酸多态性(SNP))的对象以用于司法目的等用途，对它们的三维结构进行修饰，吸附至对拉曼辐射有活性的金属纳米颗粒并进行微囊化。一种通过分子生物学技术进行检测/即时认证(autenticación instantánea)和后续鉴定的方法，其总体上涉及包括十个级别(niveles)的安全系统。

本文还保护所获得遗传标志物的检测方法，对用所述方法标记的对象进行即时认证的方法；以及验证(verificar)标记的对象的方法和将标志物并入到待鉴定对象的方法。

提及的组成(componente)可选自多种等同物，而不会偏离本文中阐述的本发明原理。

背景技术

长久以来一直试图找到可为日常交易提供更高安全性的新的要素、用品(disposiciones)和机制。

自古以来，人类已经尝试使用经改良为并入导致难以复制之要素的文件来防止盗窃、欺骗和伪造。用获自不同模具的特殊图形进行密封实现了早期的期望，但印刷方法很快就发生了改变。已经克服了并入新的技术进步的安全特征并出现的质量仪器。

当从银行支票擦去数值并重新填写更高的数值时，这对抗(opuesto)了纸的标记。

一般而言，伪造的纸币和文件已导致采用特殊的纸张和墨(tinta)(光学墨)，在纸张基体、半透明的保护膜等中并入安全要素。

本发明人意识到对每个人而言特定的要素。指纹是这种情况，而DNA也是这种情况。

事实上，每个个体均具有生物学痕迹，这是独特的并且当前的技术可以绝对确定性对其进行鉴定。

虽然这是正确的，但是本发明人清楚地知晓，为准确阳性鉴定向对象并入生物完整的DNA分子将很容易被伪造者利用；因为这将足够接近这样DNA的拥有者并从其获得生物样品。

事实上，头发、沉积在玻璃上的唾液、一滴血液甚至是一点皮肤将足以获得添加到伪造对象所需的DNA；然后，它将明显地看起来是真的。

发明人在文件200020102319 AR中已经预见到了这点，其导致US 10/307012和EP 33801366的出现；它们被认为是本文件主题的最接近现有技术。

事实上，考虑到所述可能性，本发明人在上述文件中已公开了待鉴定对象应标记有至少一个特定的多态性DNA片段。

对于伪造者而言，仅使用一个多态性DNA片段不足以获得完整的DNA，因为他必须知道哪个是所使用DNA的选定片段(或片段的组合)。然而，这有数十亿种可能的组合，伪造者几乎不可能偶然地使用到用户选择的组合，因而得到了一种高效遗传标志物。

虽然所引用文件涵盖的标志物是高效的，但是本发明人发现计算机的处理能力允许每秒数百万次的操作，这增加了伪造者的机会。

如在引用文件中所公开的，本发明人知晓检测用作对象之标志物的DNA片段需要并不是在所有实验室均可得的高技术基础设施；所以对多态性DNA片段之检测方法的简化会扩展这种类型标志物的使用。此外，任何分子学科学家都应认识到，尽管想要进行伪造的实验室可能对于这些技术而言非常专业，但是除非预先知晓精确的核苷酸序列，否则无法复制本文中详述的这样的多态性片段(STR/SNP)；因为实验室检测所需的试剂(引物)是基于该知识而制备的。

鉴于对所公开内容这样的观察结果，本发明人已经确定本发明的一个目的是获得由存在于自然界的任何生物之多态性DNA片段形成的标志物。

这意味着，可以从人类以及动物、植物、微生物或病毒获得待使用的片段。

为获得本文件中所公开的标志物，使用从所有这些物种获得的不同多态性DNA片段的组合是很方便的。

为了通过拉曼光谱进行即时检测并且也为了提高标志物的复杂度(这有助于避免伪造)，本发明人已对此类多态性片段的三维结构进行了几何修饰，然后使其吸附到纳米金属颗粒上。

这种更高的复杂度防止伪造者披露标志物的结构，尤其是当其与所用的STR和SNP的相对浓度和绝对浓度整合在一起时。

本发明的第二目的是获得允许对标记的对象实时进行检测和即时认证的方法和装置。

本发明的第三目的是获得包括多个安全级别的方法；伪造者需跨过这些安全级别从而复制这样的遗传标志物。

脱氧核糖核酸(DNA)是存储特定个体遗传信息的大分子。

DNA的三维几何结构是双螺旋，可以观察到大沟和小沟。前者深且宽，而后者浅且窄。