[发明专利]一种从银杏叶提取物中分离纯化GA、GB和白果内酯的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种银杏内酯A、B和白果内酯的方法，具体为一种从银杏叶提取物中分离纯化GA、GB和白果内酯的方法。

背景技术

银杏叶提取物在促进循环系统的血小板活化、抗氧化作用、抗衰老功能、抗老年性痴呆和眼部视网膜病变等方面发挥了重要作用，被视为治疗神经系统疾病和心脑血管疾病的双跨性药物。据不完全统计，至2010年8月，国家食品药品监督管理局已颁发银杏叶提取物药物及复合制剂生产批文140多个，生产厂家有100多家。当今世界市场上银杏叶制品的年销售额达60亿美元以上，已成为植物药的全球冠军品种，银杏叶制剂成为治疗心脑血管疾病的领先品种。

银杏叶提取物中二萜内酯有银杏内酯，主要有银杏内酯A、B、C、M、J和白果内酯，简称GA、GB、GC、GM、GJ和BB等。银杏内酯具有专属性的抗血小板活化因子(platelet activating factor．PAF)活性，是天然的PAF拮抗剂，其中尤以GB的活性最高。GB已引起了国际药学界的广泛关注，有望成为治疗休克、烧伤、过敏性哮喘、中风、移植排斥、血液透析等病症的一类新药，目前在法国、英国等国家已经分别进入Ⅱ和Ⅲ期临床。白果内酯（BB）用于治疗神经系统疾病，如肌肉萎缩、肌挛、轻瘫、表层和深部感觉障碍、头痛、头晕、视力、听力、记忆障碍等。

文献报道的银杏内酯单体分离纯化方法主要有乙醇提取－乙酸乙酯萃取－柱色谱分离法、乙醇提取－乙酸乙酯萃取－反相色谱分离法、色谱分离－重结晶法、超临界液体萃取法等。

GA、GB和BB分离纯化方法直接相关的授权发明专利或申请专利主要有如下：

（1）中国专利（ZL00117758.3）“由银杏叶或银杏叶浸膏制备药物银杏内酯A、B的方法”，该发明涉及一种由银杏叶或银杏叶浸膏制备药物银杏内酯A、B的方法，它是以银杏叶或银杏叶浸膏为原料，经加入乙醇、或甲醇、或丙酮、或丁酮、或乙酸乙酯有机溶剂浸取，浸取液经过滤、静置分层，得到的有机相进行去杂质处理，再静置分层得到的有机相经浓缩、干燥得到富集银杏内酯A和B的浓缩物，采用制备液相色谱对含有银杏内酯A和B的浓缩物进行分离后处理，得到GA和GB，其特征在于：在加入浸取剂的同时加入氯化物盐析剂；去杂质过程是向浸取液的有机层液加入钾盐或钠盐；制备型液相色谱的分离柱的流动相是采用乙酸乙酯和石油醚的混合液，固定相采用硅胶。该方法用制备型色谱分离GA和GB，生产成本高，产量小，不适合规模化大生产等缺点。

（2）中国专利（申请号：200710050245）“从银杏叶中提取分离银杏内酯B的方法”，该发明涉及从银杏叶中提取分离银杏内酯B的方法，其步骤如下：1)取银杏叶，用由高到低不同浓度的乙醇进行提取，合并提取液，回收乙醇，得到浓缩后的提取液；2)向浓缩后的提取液中加入乙酸乙酯萃取，回收有机相后浓缩至浸膏；3)将步骤2)所得浸膏稀释后上选择性极性无孔吸附树脂柱，用乙醇洗脱，所得洗脱液回收乙醇后，再用乙醇结晶得到银杏内酯类化合物；4)将银杏内酯类化合物结晶上硅胶柱，用正己烷和乙酸乙酯的混合液洗脱，收集洗脱液，得到富集银杏内酯B的洗脱液；5)回收步骤4)中收集的洗脱液中的溶剂，再用乙醇结晶，得到银杏内酯B。该方法用工艺路线醇提－萃取－树脂纯化－结晶－硅胶柱分离－结晶等步骤，工艺路线复杂，且只分离得到GB。

（3）中国专利（申请号：201010608847.X）“一种从银杏内酯混合物中分离银杏内酯B的方法”，该发明公开了一种从银杏内酯混合物中分离银杏内酯B的方法，该方法以离子液体或者由离子液体水组成的二元混合溶剂为萃取剂，采用分馏萃取法高效地从含有银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C等银杏内酯同系物的混合物中分离银杏内酯B。该方法是以银杏内酯混合物为原料，采用分馏萃取法分离银杏内酯B。

（4）中国专利（申请号：200410061284.1）“银杏叶中银杏内酯B和白果内酯的提取方法”，该发明公开了一种银杏叶中银杏内酯B和白果内酯的提取方法。将银杏叶烘干、去杂、粉碎，用乙醇水溶液提取，上吸附柱去杂质，然后用乙酸乙酯萃取出银杏内酯，上氧化铝柱纯化，分步结晶及重结晶，获得较纯的银杏内酯B和白果内酯。