[发明专利]利用线虫幼虫检测塑化剂的方法

权利要求书

1.利用线虫幼虫检测塑化剂的方法，其特征在于利用线虫幼虫检测塑化剂的方法如下：

一、称取1.0g胆固醇，溶于无水乙醇中，配制成浓度为10mg/ml的胆固醇乙醇溶液；

二、配制磷酸盐缓冲液：称取13.6g KH₂PO₄、1.8g KOH，加蒸馏水定容至100mL，调节pH值为6.0；

三、将15～20g琼脂粉、2～3g蛋白胨、0.10～0.12g CaCl₂、0.11～0.13g MgSO₄和2～3g NaCl加入到1000mL的烧杯中，加入1ml胆固醇乙醇溶液和25mL磷酸盐缓冲液，用蒸馏水定容至1000ml；

四、将烧杯封口，放入高压蒸汽灭菌锅中于120℃灭菌15～25min，然后降温至50～60℃，在无菌环境下加入0.5～5ml待测白酒，然后将混合物在无菌环境下倒入培养皿中，在温度为20℃的无菌环境下干燥8h～12h，即得线虫培养基；

五、向线虫培养基中均匀涂入浓度为1×10⁹个/mL～2×10⁹个/mL大肠杆菌OP50菌液0.8～1.2mL，于37℃培养8～12h，接入8～12条L2期的线虫幼虫，培养12h，然后观测L2期线虫死亡率，线虫幼虫死亡率＞10％，则表明待检测白酒含有塑化剂。

2.根据权利要求1所述利用线虫幼虫检测塑化剂的方法，其特征在于步骤二中将16～19g琼脂粉、2g蛋白胨、0.10g CaCl₂、0.11g MgSO₄和2g NaCl加入到1000mL的烧杯中。

3.根据权利要求1所述利用线虫幼虫检测塑化剂的方法，其特征在于步骤二中将15g琼脂粉、2g蛋白胨、0.10g CaCl₂、0.11g MgSO₄和2g NaCl加入到1000mL的烧杯中。

4.根据权利要求1所述利用线虫幼虫检测塑化剂的方法，其特征在于步骤二中将20g琼脂粉、3g蛋白胨、0.12g CaCl₂、0.13g MgSO₄和3g NaCl加入到1000mL的烧杯中。

5.根据权利要求1所述利用线虫幼虫检测塑化剂的方法，其特征在于步骤四中降温至52～58℃。

6.根据权利要求1所述利用线虫幼虫检测塑化剂的方法，其特征在于步骤四中降温至55℃。

7.根据权利要求1所述利用线虫幼虫检测塑化剂的方法，其特征在于步骤四中在温度为20℃的无菌环境下干燥10h。

8.根据权利要求1所述利用线虫幼虫检测塑化剂的方法，其特征在于步骤五中向线虫培养基中均匀涂入浓度为1×10⁹个/mL～2×10⁹个/mL大肠杆菌OP50菌液1mL。

9.根据权利要求1所述利用线虫幼虫检测塑化剂的方法，其特征在于步骤五中于37℃培养10h。

10.根据权利要求1所述利用线虫幼虫检测塑化剂的方法，其特征在于步骤五中接入10条L2期的线虫幼虫。