[发明专利]绞股蓝内生真菌及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及微生物及其微生物应用领域。具体涉及一种绞股蓝内生真菌及其发酵液中含有多种天然活性物质，可用于制取防治疾病药物的用途。

背景技术

绞股蓝（Gynostemma）为葫芦科多年生草质藤本植物，主要含有皂苷元、多糖、黄酮类、有机酸、生物碱、萜类等多种生物活性物质。其中皂甙的含量最高，其功能与西洋参相近，故又被称为“南方人参”。研究表明，绞股蓝具有抑制肿瘤、抗氧化、降血脂、降血压、降血糖、增强免疫、保护心脏和肝脏、镇静止痛及抗炎、抗溃疡等多种药理作用。

内生真菌（Endophytic fungi）是指生活在健康植株组织内部的微生物。内生菌在其与宿主植物长期协同进化的过程中，形成了典型的互惠共生关系，不仅能促进宿主植物生长，而且能诱导宿主植物细胞活性物质的代谢，提高药用植物的药效和抗逆的能力。

绞股蓝作为常用多功效药用植物，许多学者对其内生真菌进行研究。周生亮等（周生亮, 等, 2007）自绞股蓝中分离出16株内生真菌，具有抗菌性的内生真菌占10%；魏希颖研究小组（尚菲, 等, 2011；Zhang Qingmiao, et al., 2012）从绞股蓝中分离出产皂苷的内生真菌G4、G10株，具有强的抗氧化活性，经形态和分子学初步鉴定为柔膜菌目(Helotiales)。因而，绞股蓝中含有大量产生多种天然药性物质的内生真菌。

发明内容

本发明的目的在于提供一种绞股蓝内生真菌（Chaetomium sp.），除了能够产生类似绞股蓝植物的多种生物活性物质多糖和黄酮外，还产生皂苷、有机酸、醌类等物质，具有抗氧化、降低血糖、抗癌、抗菌等作用。

本发明的另一个目的在于对上述绞股蓝内生真菌发酵液中多种天然活性物质的分离提取，以制备具有抗肿瘤、抗氧化、抗糖尿病、抗衰老、减肥、抗慢性炎症、增强免疫力等功效药物的应用。

本发明的绞股蓝内生真菌命名为毛壳菌（Chaetomium sp.），保藏单位是中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院中国科学院微生物研究所，保藏日期：2012年11月26日，保藏登记号为CGMCC NO：6882。

本发明所述的绞股蓝内生真菌命名为JY25，为子囊菌亚门[Ascomycotina]，核菌纲[Pyrenomycetes]，球壳目[Sphaeriales]，黑孢壳科[Melanosporaceae]，毛壳菌属[Chaetomium sp]。

该菌株在PDA和察氏固体培养基中，28℃培养5~7 d，菌落直径分别为2.5 mm、4.3 mm，早期菌落呈白色平铺，气生菌丝少；随着时间的延长，气生菌丝增长旺盛呈絮状，逐渐呈现出黄褐色，7 d后表面形成大量沙状孢子，菌落边缘不整齐（附图1 A），背面呈棕褐色（附图1 B）。显微镜下观察，菌丝有隔膜、透明、交织（附图2 A），子囊壳球形、卵形，顶端有一孔口，子囊壳初期半透明，后期呈暗色（附图2 B）。

本发明所述的绞股蓝内生真菌PDA液体培养的特征为。

1、培养条件：在液体PDA中添加1%的绞股蓝汁提取液，以28 ℃ 160 rpm摇床培养9 d，其中，发酵初始pH 5，种子液接种量为3%，装液量为100 mL/250 mL摇瓶，产生的抗菌特性最佳。

2、发酵液特性：培养1-3 d，培养液较清亮，颜色淡黄，有零星菌丝白点；培养4-6 d，培养液逐渐变稠，呈深黄色，菌丝球逐渐增多；培养7-9 d，培养液呈深棕色、粘稠，不能分辨出菌丝。

采用分子生物学方法，对真核生物核糖体RNA(rRNA)的ITS序列分析得出绞股蓝内生真菌JY25的ITS序列长度为599 bp，在GenBank中登录号为：JN180937.1（附图3）。