[发明专利]一种水产用微生态净水剂及其制备和应用方法

权利要求书

1.一种水产用微生态净水剂的制备方法，其特征在于，由蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）CGMCC No.4918、侧孢芽孢杆菌（bacillus laterosporus）CGMCC No.6885和酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）CGMCC No.6884，这3种菌的发酵菌液按1:1:1的体积比配制而成。

2.根据权利要求1所述的水产用微生态净水剂的制备方法，其特征在于，

1）蜡状芽孢杆菌发酵菌液的制备依次包括以下步骤

新鲜斜面菌种制备，其条件为：LB培养基，30℃，24h；

摇床种子培养，其条件为：pH7.2~7.5、温度30℃~32℃，转速200r/min~220r/min，培养10~12h；培养基的组成为蛋白胨10g，NaCl5g，牛肉膏3g，蒸馏水定容至1L；

液体发酵，其条件为：20L发酵罐培养基装量为12L，搅拌速度200r/min~220r/min，初始pH7.0~7.2，通气比为1.1:1~1.2:1，摇床种子培养液接种量为培养基体积的3%~4%，30℃~32℃温度下发酵24h~28h；培养基组成为：玉米淀粉1.8%~2.0%，工业蛋白胨1.0%~1.2%，MnSO₄0.02%，CaCl₂0.02%~0.03%，K₂HPO₄0.012%，KH₂PO₄0.025%，其余为水；每次发酵芽孢数在1.8×10¹⁰cfu/mL~2.5×10¹⁰cfu/mL之间；

2）侧孢芽孢杆菌发酵菌液的制备依次包括以下步骤：

新鲜斜面菌种制备，其条件为：LB培养基，35℃，28h；

摇床种子培养，其条件为：pH7.0~7.2、温度32℃~35℃，转速180r/min~200r/min，培养14h~16h；培养基的组成为：蛋白胨10g，NaCl5g，牛肉膏3g，蒸馏水定容至1L；

液体发酵，其条件为：20L发酵罐培养基装量为12L，搅拌速度180r/min~200r/min，初始pH7.0~7.2，通气比1:1~1.1:1，摇床种子培养液接种量为培养基体积的3%~4%，32℃~35℃温度下发酵28h~36h；培养基组成为：葡萄糖2.0%~2.2%，酵母膏0.9%~1.1%，MnSO₄0.02%，CaCl₂0.02%~0.03%，KH₂PO₄0.01%，MgSO₄0.005%，其余为水；每次发酵芽孢数在8×10⁹cfu/mL~1.02×10¹⁰cfu/mL之间；

3）酿酒酵母发酵菌液的制备依次包括以下步骤：

新鲜斜面菌种制备，其条件为：PDA培养基，28℃，36h~48h；

摇床种子培养，其条件为：pH自然、温度26℃~28℃，转速180r/min~200r/min，培养24h~28h；培养基的组成为葡萄糖20g，酵母膏10g，蛋白胨10g，蒸馏水定容至1L；

液体发酵，其条件为：20L发酵罐培养基装量为12L，搅拌速度180r/min~200r/min，初始pH6.0~6.5，通气比为0.9:1～1:1，摇床种子培养液接种量为培养基体积的4%~5%，26℃~28℃温度下发酵28h~36h；培养基组成为蔗糖2%~2.5%，硫酸铵1%~1.5%，氯化钙0.5%~0.8%，生物素0.01%，磷酸二氢钾0.01%，氯化钠0.01%，硫酸镁0.03%~0.06%，其余为水；酿酒酵母的发酵菌数达7.4×10⁸cfu/mL~9.5×10⁸cfu/mL。

3.根据权利要求2所述的水产用微生态净水剂的制备方法，其特征在于，

将三种菌的发酵菌液按体积比1:1:1搅拌混匀，搅拌速度50r/min~80r/min，搅拌时间10min~30min，制得水产用微生态净水剂，其成品活菌数不低于9×10⁹cfu/mL。

4.一种水产用微生态净水剂，其特征在于，是由权利要求1-3任一项所述的方法制备而成的。