[发明专利]一种人体自身抗体联检试纸条及其制备方法

权利要求书

1.一种人体自身抗体联检试纸条，其特征在于，包括样品垫(1)、与所述样品垫(1)一端紧密相连的含有胶体金颗粒标记物的玻璃纤维膜(2)、与所述玻璃纤维膜(2)另一端紧密相连的硝酸纤维素膜(3)、以及与所述硝酸纤维素膜(3)的另一端紧密相连的吸水纸(4)，所述样品垫(1)、玻璃纤维膜(2)、硝酸纤维素膜(3)和吸水纸(4)均设置于底板(5)上，所述硝酸纤维素膜(3)包括包被有系统性红斑狼疮sm重组抗原的检测区(6)、包被有系统性硬化症Scl-70重组抗原的检测区(7)，以及包被有羊抗鼠抗体的控制区(8)，所述胶体金颗粒标记物包括微信号放大系统和胶体金标记的鼠IgG抗体，所述微信号放大系统为胶体金颗粒-亲和素-生物素-sm/SCL-70重组抗原。

2.根据权利要求1所述的人体自身抗体联检试纸条，其特征在于平行包被了系统性红斑狼疮sm重组抗原和系统性硬化症SCL-70重组抗原，可以同时检测系统性红斑狼疮和系统性硬化症。

3.根据权利要求2所述的人体自身抗体联检试纸条，其特征在于，所述系统性红斑狼疮sm重组抗原用量为0.13-0.27μg/mm，所述系统性硬化症SCL-70重组蛋白用量为0.13-0.27μg/mm。

4.根据权利要求1-3所述的人体自身抗体联检试纸条，其特征在于，所述胶体金颗粒-亲和素-生物素-sm/Scl-70重组抗原复合物的用量为12.5-68μg/cm²。

5.根据权利要求1所述的人体自身抗体联检试纸条，其特征在于，所述胶体金标记有鼠IgG抗体，用量为15-50μg/cm²。

6.根据权利要求1所述的人体自身抗体联检试纸条，其特征在于，所述羊抗鼠抗体为羊抗鼠IgG抗体，所述羊抗鼠抗体的用量为0.20-0.48μg/mm。

7.一种制备权利要求1所述的人体自身抗体联检试纸条的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)制备系统性红斑狼疮sm重组抗原、系统性硬化症Scl-70重组抗原以及胶体金标记鼠IgG抗体；

(2)制备微信号放大系统

a、制备胶体金标记亲和素

将待标记亲和素预先在0.001～0.01mol/L的NaCl溶液中透析过夜，离心，调节胶体金液的pH值至9～10，标记亲和素以形成胶体金标记亲和素；

b、按常规方法制备生物素化sm重组抗原和生物素化Scl-70重组抗原；

c、完成微信号放大系统

将步骤a得到的胶体金标记亲和素和步骤b得到的生物素化sm/Scl-70重组抗原混合，连接得到胶体金-亲和素-生物素-sm/Scl-70重组抗原复合物，洗涤，即得微信号放大系统；

(3)按稀释参数25～40cm²/ml，将步骤(2)的胶体金-亲和素-生物素-sm重组蛋白、以及胶体金-亲和素-生物素-Scl-70重组蛋白喷洒到玻璃纤维膜上，干燥12个小时以上，备用；

(4)用包被缓冲液稀释sm重组抗原，使其浓度为1.0～1.5mg/ml，按膜液量0.15～0.2μl/mm，将其细致均匀的喷到硝酸纤维素膜上，干燥12个小时以上，备用；

用包被缓冲液稀释Scl-70重组抗原，使其浓度为1.0～1.5mg/ml，按膜液量0.15～0.20μl/mm，将其细致均匀的喷到硝酸纤维素膜上，干燥12个小时以上，备用；

用包被缓冲液稀释羊抗鼠抗体，使其浓度为1.0～2.0mg/ml，按膜液量0.16～0.20μl/mm，将其细致均匀的喷到硝酸纤维素膜上，干燥12个小时以上，备用；

(5)将样品垫、步骤(3)的玻璃纤维膜、步骤(4)的硝酸纤维素膜、吸水纸按序粘贴于底板上，即得。

8.根据权利要求7所述的人体自身抗体联检试纸条的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中胶体金-亲和素-生物素-sm重组抗原复合物的用量为12.5-68μg/cm²，胶体金-亲和素-生物素-Scl-70重组抗原复合物的用量为12.5-68μg/cm²。

9.根据权利要求7所述的人体自身抗体联检试纸条的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中sm重组抗原用量为0.13-0.27μg/mm；Scl-70重组抗原的用量为0.13-0.27μg/mm；所述羊抗鼠抗体的用量为0.20-0.48μg/mm。