[发明专利]一种人体自身抗体联检试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医学检验领域，尤其涉及一种人体自身抗体联检试纸条及其制备方法。

背景技术

自身抗体指针对自身组织、器官、细胞及细胞成分的抗体。人体的生长、发育和生存有完整的自身免疫耐受机制的维持，正常的免疫反应有保护性防御作用，即对自身组织、成分不发生反应。一旦自身耐受的完整性遭到破坏，则机体视自身组织、成分为“异物”，而发生自身免疫反应，产生自身抗体。这些自身抗体会攻击机体自身细胞、组织、器官，引起炎症反应，对机体造成伤害。常见的自身免疫疾病包括有结缔组织疾病、类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、皮肌炎、系统系硬化症、神经肌肉疾病、多发性硬化症、重症肌无力、脱髓鞘疾病、内分泌性疾病、原发性肾上腺皮质萎缩、慢性甲状炎、青少年型糖尿病、消化系统疾病慢性非特异性溃疡性结肠炎、慢性活动性肝炎、恶习性贫血与萎缩性胃炎等。

其中系统性红斑狼疮和系统性硬化症在结缔组织病中分别位居第一位和第二位。系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)是一种弥漫性、全身性自身免疫病，主要累及皮肤粘膜、骨骼肌肉、肾脏及中枢神经系统，同时还会累及肺、心脏、血液等多个器官和系统，出现多种临床表现；血清中可检测到多种自身抗体和免疫学异常。SLE好发于青年女性，发病高峰为15～40岁，男女发病比例为1∶9左右。幼年和老年性SLE的男女之比约为1∶2。全球的患病率约为30～50/10万人，我国的患病率约为70/10万人。尽管SLE的发病受遗传因素的影响，但大多数为散发病例。系统性硬化症(硬皮病)是一种以皮肤各系统胶原纤维硬化为特征的结缔组织疾病。累及内脏器官的系统性硬皮病又称系统性硬化症。本病在结缔组织病中仅次于红斑狼疮而居第二位。患者以女性较多，女性与男性之比约为3∶1。发病年龄以20～50岁多见。

Sm抗体正常参考值为阴性，在临床上是系统性红斑狼疮(SLE)的血清标记抗体。Scl-70抗体正常参考值为阴性，在临床上是全身性硬皮病(PSS)的血清标记性抗体。

作为自身免疫病的重要血清标志物，人体自身抗体的快速检测对于自身免疫性疾病的诊断、预后和转归判断及理解疾病的病理过程有重要的应用价值和理论意义。

Sm抗体和Scl-70抗体均属于抗核内可溶性抗原抗体(ENA)范畴，常用的检测方法有凝胶对流电泳、免疫双扩散和免疫印迹法。目前最常用的是免疫印迹法，即采用免疫印迹法技术，通过凝胶电泳对混合抗原进行蛋白分子分离，再将分离出来的蛋白分子转印到膜上，将膜晾干，切成条，制作成检测膜条，再跟试剂盒的其他组成成分配合使用。该方法虽然具有可一次性同时检测多种自身抗体疾病及价格低廉等优点，但制作工艺较为繁杂，耗时长，不利于普及，且背景色复杂，不利于结果的判读。

如上所述，基于纳米金检测技术，再添加亲和素-生物素信号扩大系统，结合重组抗原制备技术，同时通过调整不同的制备工艺参数，在克服纳米金灵敏度不足的同时也可以实现系统性红斑狼疮和系统性硬化症的同步检测。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术中存在的自身抗体检测膜条制作工艺繁杂，耗时长，不利于普及，且背景色复杂，不利于结果的判读等缺陷，提供了一种人体自身抗体联检试纸条及其制备方法。

为实现上述目的，本发明采取了以下技术方案：

1.一种人体自身抗体联检试纸条，包括样品垫(1)、与所述样品垫(1)一端紧密相连的含有胶体金颗粒标记物的玻璃纤维膜(2)、与所述玻璃纤维膜(2)另一端紧密相连的硝酸纤维素膜(3)、以及与所述硝酸纤维素膜(3)的另一端紧密相连的吸水纸(4)，所述样品垫(1)、玻璃纤维膜(2)、硝酸纤维素膜(3)和吸水纸(4)均设置于底板(5)上，所述硝酸纤维素膜(3)包被有系统性红斑狼疮sm重组抗原的检测区(6)和系统性硬化症Scl-70重组抗原的检测区(7)，以及包被有羊抗鼠抗体的控制区(8)，所述胶体金颗粒标记物包括微信号放大系统和胶体金标记的鼠IgG，所述微信号放大系统为胶体金颗粒-亲和素-生物素-sm/Scl-70重组抗原。

优选地，所述系统性红斑狼疮sm重组抗原用量为0.13-0.27μg/mm，所述系统性硬化症Scl-70重组蛋白用量为0.13-0.27μg/mm，所述胶体金标记有鼠IgG抗体，用量为15-50μg/cm²。所述胶体金颗粒-亲和素-生物素-Sm/SCL-70重组抗原复合物的用量为12.5-68μg/cm²。所述羊抗鼠抗体为羊抗鼠IgG抗体，所述羊抗鼠抗体的用量为0.20-0.48μg/mm。