[发明专利]一种烟草黑胫病抗性的快速鉴定方法

权利要求书

1.一种烟草黑胫病抗性的快速鉴定方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）取待鉴定的烟草种子表面消毒；

（2）烟草黑胫病菌的培养及其分生孢子悬浮液的制备；

（3）烟草黑胫病菌毒素液的提取：将步骤（2）制备的分生孢子悬浮液稀释为1×10⁵～5×10⁶个孢子含量，滤纸过滤，滤液高速离心，取上清液用0.45μm微孔滤膜过滤，得无菌的烟草黑胫病菌毒素液；

（4）将步骤（1）表面消毒后的烟草种子用步骤（3）提取的毒素液浸泡4-8h，然后将烟草种子移到琼脂水培养基上，保持在相对湿度90%-95%、光照强度为10001x-20001x、温度在18℃-25℃的条件下，7-10d后开始观察发芽情况，根据发芽率判断供试材料的抗性：发芽抑制率≥50%为感病品种，15%≤发芽抑制率在＞50%为中抗品种，发芽抑制率＜15%为抗病品种。

2.根据权利要求1所述的烟草黑胫病抗性的快速鉴定方法，其特征在于：步骤（1）按如下方法操作：取待鉴定的烟草种子置于无菌培养皿中，用1%（w/v）硫酸铜溶液浸种5min，然后用无菌水冲洗3次。

3.根据权利要求1所述的烟草黑胫病抗性的快速鉴定方法，其特征在于：步骤（2）按如下方法操作：将烟草黑胫病菌接种于燕麦固体培养基中，28℃培养7-14d，待菌丝长满整个培养皿后，取菌块加入到燕麦液体培养基中28℃振荡7-14d，得烟草黑胫病菌分生孢子悬浮液。

4.根据权利要求3所述的烟草黑胫病抗性的快速鉴定方法，其特征在于：所述的燕麦固体培养基的制作方法为：在1000mL无菌水中加入33g燕麦片，煮至燕麦片开花状，加18g琼脂粉，定容1000mL，分装入500mL三角瓶中高压120℃灭菌20min。

5.根据权利要求3所述的烟草黑胫病抗性的快速鉴定方法，其特征在于：所述的燕麦液体培养基的制作方法为：在1000mL无菌水中加入33g燕麦片，煮至燕麦片开花状，定容1000mL，分装入500mL三角瓶中高压120℃灭菌20min。

6.根据权利要求1所述的烟草黑胫病抗性的快速鉴定方法，其特征在于：步骤（3）中所述的分生孢子悬浮液被稀释至9×10⁵孢子含量。

7.根据权利要求1所述的烟草黑胫病抗性的快速鉴定方法，其特征在于：步骤（4）中所述的琼脂水培养基的制作方法为：在1000mL无菌水中加入18g琼脂粉，定容1000mL，分装入500mL三角瓶中高压120℃灭菌20min。