[发明专利]利用高通量组织芯片检测BSP在脑胶质瘤中的表达的方法无效
| 申请号： | 201310012888.6 | 申请日： | 2013-01-14 |
| 公开（公告）号： | CN103088130A | 公开（公告）日： | 2013-05-08 |
| 发明（设计）人： | 陈菊祥;徐涛;秦荣;卢亦成;严勇;周劲旭;王洪祥 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第二军医大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;G01N33/68 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所 31233 | 代理人： | 黄志达 |
| 地址： | 200433 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 利用 通量 组织 芯片 检测 bsp 胶质 中的 表达 方法 | ||
1.一种利用高通量组织芯片检测BSP在脑胶质瘤中的表达的方法，包括：
（1）使用Trizol试剂将脑组织进行总RNA的分离；
（2）对步骤（1）得到的总RNA进行反转录，得到cDNA；
（3）将上述cDNA与SYBR荧光染料混合并进行扩增；
（4）IBSP的表达通过抗GAPDH进行标准化，使用以下方程进行比较阈值循环法：表达折叠差异=2-(Δ目标基因的ct值–Δ参照ct值)；
（5）构建组织芯片，然后进行免疫组化染色，对免疫组化结果进行统计分析，检测BSP在脑胶质瘤中的表达。
2.根据权利要求1所述的一种利用高通量组织芯片检测BSP在脑胶质瘤中的表达的方法，其特征在于：步骤（1）中所述的脑组织为胶质瘤或正常脑组织。
3.根据权利要求1所述的一种利用高通量组织芯片检测BSP在脑胶质瘤中的表达的方法，其特征在于：步骤（2）中所述的总RNA的质量为2ug，得到cDNA的质量为20ng。
4.根据权利要求1所述的一种利用高通量组织芯片检测BSP在脑胶质瘤中的表达的方法，其特征在于：步骤（2）中所述的反转录为使用M-MLV反转录箱进行的。
5.根据权利要求1所述的一种利用高通量组织芯片检测BSP在脑胶质瘤中的表达的方法，其特征在于：步骤（3）中所述的扩增为在CFX96实时探测系统中进行。
6.根据权利要求1所述的一种利用高通量组织芯片检测BSP在脑胶质瘤中的表达的方法，其特征在于：步骤（3）中所述的扩增条件为42℃孵育60分钟，95℃孵育5分钟后冰上冷却。
7.根据权利要求1所述的一种利用高通量组织芯片检测BSP在脑胶质瘤中的表达的方法，其特征在于：所用的引物为：IBSP，5'-AAAGTGAGAACGGGGAACCTR-3'正链，5'-GATGCAAAGCCAGAATGGAT-3'反链；GAPDH,5'-GAAGGTGAAGGTCGGAGTC-3'正链，5'-GAAGATGGTGATGGGATTTC-3'反链。
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