[发明专利]一种曲普瑞林及其固相合成制备方法

权利要求书

1.固相合成曲普瑞林的方法，其包括以下步骤：

(1)向经浸泡处理的固相合成用树脂中加入溶解于溶剂中的Fmoc-Gly-OH、肽偶联剂、酰胺键形成促进剂和有机碱，使物料进行偶联反应，以形成Fmoc-Gly-树脂；

(2)向上一步骤所得的肽偶合树脂中加入脱帽试剂，使物料进行反应以脱帽；接着加入溶解于溶剂中的保护氨基酸Fmoc-Pro-OH、肽偶联剂、酰胺键形成促进剂和有机碱，使物料进行偶联反应，以形成Fmoc-Pro-Gly-树脂；

(3)循环重复步骤(2)，并在每一循环操作的偶联反应中依次使用下列氨基酸以替换保护氨基酸Fmoc-Pro-OH：Fmoc-L-Arg(pbf)-OH、Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-D-trp(bo c)-OH、Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-trp(boc)-OH、Fmoc-L-His(trt)-OH和H-Pyr-OH，以最终形成十肽树脂：H-Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂；

(4)向步骤(3)所得十肽树脂中加入切割液进行切肽反应，以使十肽从树脂上切割下来，得到曲普瑞林。

2.根据权利要求1的方法，其特征在于，其中步骤(1)中：

所述树脂选自：rink amide MBHA树脂、rink amide am树脂、knorr树脂、或其组合；

所述肽偶联剂选自：DCC、DIC、HATU、HBTU、HCTU、TATU、TBTU、或其组合；

所述酰胺键形成促进剂选自：HOAT、HOBT、6-Cl-HOBt、或其组合；

所述有机碱选自：NMM、DIEA、三甲基吡啶、或其组合；

用于进行偶联反应的所述溶剂选自：二氯甲烷、二甲基甲酰胺；

所述树脂浸泡处理是照如下方式进行的：取树脂置于反应器中，加入溶剂振荡并充分浸泡，抽除溶剂；

所述树脂在经浸泡处理后、进行偶联反应之前，还包括对该树脂进行脱帽处理的步骤；

所述树脂与所述Fmoc-Gly-OH的投料比为1：2.5~5(摩尔比)；进一步地，在后续的各个肽偶联反应中，添加的该步骤的氨基酸(Fmoc保护的或未保护的)的量为步骤(1)中树脂量的2~7倍(摩尔倍)；

所述Fmoc-Gly-OH、肽偶联剂、酰胺键形成促进剂和有机碱四者的投料比为1：1-3：1-3：2-6(摩尔比)；和/或

步骤(1)中，还包括在完成偶联反应后对获得的Fmoc-Gly-树脂进行清洗的操作，所述清洗是使用选自下列的溶剂清洗处理1~3次、甲醇、乙醇、氯仿、三氟乙酸、DM F、或其组合，特别是使用DMF、甲醇、二氯甲烷，三者交替清洗2次。

3.根据权利要求1的方法，其特征在于，其中步骤(2)中：

所述脱帽试剂选自哌啶、二乙胺、三乙胺、三氟乙酸。

所述脱帽反应是在选自下列的溶剂中进行的：二氯甲烷、二甲基甲酰胺等，优选二甲基甲酰胺；

所述脱帽反应是在15~25%的哌啶/二甲基甲酰胺溶液中进行的，优选是在20%的哌啶/二甲基甲酰胺溶液中进行的；

步骤(2)中，还包括在完成脱帽反应后对获得的Gly-树脂进行清洗的操作，所述清洗是使用选自下列的溶剂清洗处理1~3次、甲醇、乙醇、氯仿、三氟乙酸、DMF、或其组合，特别是使用DMF、甲醇、二氯甲烷，三者交替清洗2次；和/或

所述偶联反应是参照步骤(1)中的偶联反应进行的。