[发明专利]一种曲普瑞林及其固相合成制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及曲普瑞林原料药的生产工艺，尤其是固相合成工艺以及纯化方法。本发明还涉及一种曲普瑞林。

背景技术：

曲普瑞林，已以其醋酸盐或者巴莫酸盐的形式应用于临床，临床适应症包括前列腺癌、性早熟、辅助生殖技术(ART)例如体外受精术(IVF)、子宫内膜异位症和子宫肌瘤等，已上市产品例如有达菲曲普瑞林英文名为：Triptorelin，别名有：垂普托雷林、色氨瑞林、Decapeptyl等，其CAS登记号为57773-63-4，分子式，C64H82N18O13，分子量1311.45。曲普瑞林的肽序为：Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH₂。

曲普瑞林系合成的促性腺激素释放激素(GnRH)的类似物。其结构的改良是将天然分子结构中的第六个左旋氨基酸(甘氨酸)，以右旋色氨酸取代以使其促效作用更为显著。曲普瑞林作用与GnRH相同，但其血浆半衰期延长且对GnRH受体的亲和力更强，因此曲普瑞林成为GnRH受体的强力激动剂。曲普瑞林注射后，最初会刺激垂体分泌促性腺激素(Gn)，即黄体生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)。当垂体经过长期的刺激后会进入不应期，促性腺激素的释放会减少，因而使性类固醇(睾丸酮或雌激素)降低至去势水平。上述作用是可逆转的。

1974年日本武天化工的Fujino Masahiko等人首先发明促黄体急速释放激素的十肽酰胺类似物的合成工艺。并在日本，德国，美国等国家申请专利，专利号分别为：J P19740027442、DE2446005、US4008209(液相法)。

此后，美国US4010125公开了曲普瑞林及其中间体以及它们的制备方法。该文献所记载的方法包括使用Boc--保护氨基酸为原料，使用二苯甲基胺(Benzhydrylamine)树脂进行固相合成。在每一轮脱帽须用三氟醋酸，并且在最终将十肽从树脂上切除时使用氢氟酸和苯甲醚。

以Fmoc-保护氨基酸为原料制备曲普瑞林亦有相关报道。例如孙永强等(孙永强、钱明霞、严益民、冯晓晖、蒋伟，曲普瑞林的液相合成，中国医药工业杂志，2012，43(7)：532)公开了使用Fmoc-保护氨基酸为原料通过液相合成法来制备曲普瑞林，在该方法中使用HBTU为偶联剂，据报道该工艺中每一次肽链延长步骤的收率仅在77%~86%之间，纯化收率为74%，总收率仅为12.4%。

因此提高产品收率以及获得具有良好品质的产品，仍然是本领域技术人员极其期待的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种制备曲普瑞林的方法，期待该方法可以得到高收率的曲普瑞林，并且期待所得曲普瑞林具有良好的品质。本发明人令人惊奇地发现，使用特定的工艺条件制备曲普瑞林，不但产率高，而且产品品质优良。本发明因此而得以完成。

为此，根据本发明的第一方面，提供了一种固相合成曲普瑞林的方法，其包括以下步骤：

(1)向经浸泡处理的固相合成用树脂中加入溶解于溶剂中的Fmoc-Gly-OH、肽偶联剂、酰胺键形成促进剂和有机碱，使物料进行偶联反应，以形成Fmoc-Gly-树脂；

(2)向上一步骤所得的肽偶合树脂(即步骤(1)所得Fmoc-Gly-树脂)中加入脱帽试剂，使物料进行反应以脱帽(即脱除Fmoc-保护基)；接着加入溶解于溶剂中的保护氨基酸F moc-Pro-OH、肽偶联剂、酰胺键形成促进剂和有机碱，使物料进行偶联反应，以形成Fmoc-Pro-Gly-树脂；

(3)循环重复步骤(2)，并在每一循环操作的偶联反应中依次使用下列氨基酸以替换保护氨基酸Fmoc-Pro-OH：Fmoc-L-Arg(pbf)-OH、Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-D-trp(bo c)-OH、Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-trp(boc)-OH、Fmoc-L-His(trt)-OH和H-Pyr-OH，以最终形成十肽树脂：H-Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂；

(4)向步骤(3)所得十肽树脂中加入切割液进行切肽反应，以使十肽从树脂上切割下来，得到曲普瑞林。