[发明专利]一种新发鸭坦布苏病毒RT-LAMP检测方法

权利要求书

1.一种用于新发鸭坦布苏病毒RT-LAMP检测的引物组，其特征是，所述的引物组包括以下六条引物：

F3：5’- AATGACATGACACCAGTTGGGCA-3’ 23；

B3：5’- ACCATCCTTTGTGCTC-3’ 16；

FIP：5’- ATGGAGGTTCCACTTCCACCTTTTACAGTCAACCCATACGTGT-3’ 43；

BIP：5’- GGTAGGAAGTGGAAAAGGACTTTTTAAAAGCTTTTCCAATTGT-3’ 43；

FLP：5’- GGCACCCGTGGAGGAGGTCG-3’ 20；

BLP：5’- AGATCAGGTACCAGTGGCATAG-3’ 22。

2.一种包含权利要求1所述六条引物的新发鸭坦布苏病毒RT-LAMP检测方法，其特征是，包括有步骤：疑似病毒RNA的Trizol法提取、RT反应、LAMP反应和扩增产物检测。

3.根据权利要求2所述的新发鸭坦布苏病毒RT-LAMP检测方法，其特征是：所述的RT反应为20μL的PCR反应体系，包括有：

Mg²⁺                                                 20～40pM

dNTP                         10～30pM；

5×RT缓冲液                   4.0μL；

BLP                          10～30pM；

BIP                          10～30pM；

B3                           10～30pM；

RNA酶抑制剂                   20U；

AMV 反转录酶                   5～15U；

疑似RNA模板                 100pg-1μg；

PCR反应程序为：70℃ 5min，42℃ 30min，95℃ 2min。

4.根据权利要求2所述的新发鸭坦布苏病毒LAMP检测方法，其特征是：所述LAMP反应为25μL反应体系，包括有：

dNTP                             30～40pM；

Triton X-100                  0.1%（体积分数）；

Bst DNA聚合酶                     6～10U； 

RT反应所得模板                     1～5μL；

甜菜碱                             0.5～1M；

FIP                                30～50pM；

BIP                                30～50pM；

F3                                  2～7pM；

B3                                  2～7pM；

FLP                                10～30pM；

BLP                                10～30pM；

反应条件为：63℃ 50min，80℃ 2min。

5.根据权利要求3所述的新发鸭坦布苏病毒RT检测方法，其特征是：在RT反应程序达42℃时，加入AMV反转录酶5～15U。