[发明专利]人β-NGF的重组表达载体及含该载体的重组细胞株

权利要求书

1.一种表达人β-NGF的重组表达载体，其特征在于，依次包含以下可操 作性相连的元件：启动子、β球蛋白基因内含子、人β-NGF基因、内部核糖 体进入位点序列和筛选标记基因；所述β球蛋白基因内含子序列如SEQ ID  No.1所示，人β-NGF基因序列如SEQ ID No.2所示，内部核糖体进入位点序 列如SEQ ID No.3所示，所述启动子为CMV启动子、PGK启动子、RSV启 动子或SV40启动子中的任意一种。

2.如权利要求1所述的重组表达载体，其特征在于，所述筛选标记基因 为二氢叶酸还原酶基因、新霉素抗性基因、博来霉素抗性基因或潮霉素抗性 基因。

3.一种重组真核细胞，其特征在于，所述真核细胞含有权利要求1所述 的重组表达载体；或者所述真核细胞的基因组中整合有以下可操作性相连的 元件：启动子、β球蛋白基因内含子、人β-NGF基因、内部核糖体进入位点 序列和筛选标记基因；所述β球蛋白基因内含子序列如SEQ ID No.1所示， 人β-NGF基因序列如SEQ ID No.2所示，内部核糖体进入位点序列如SEQ ID  No.3所示，所述启动子为CMV启动子、PGK启动子、RSV启动子或SV40 启动子中的任意一种。

4.如权利要求3所述的重组真核细胞，其特征在于，所述真核细胞为人 NIH293细胞、中国仓鼠CHO细胞、COS细胞或MDCK细胞。

5.如权利要求3所述的重组真核细胞，其特征在于，所述筛选标记基因 为二氢叶酸还原酶基因、谷氨酰胺合成酶基因、新霉素抗性基因、博来霉素 抗性基因、潮霉素抗性基因或多色霉素抗性基因中的任意一种。

6.一种生产重组人β-NGF的方法，包括如下步骤：

（1）将权利要求1所述重组表达载体转染真核细胞；

（2）筛选含有权利要求1所述重组表达载体的细胞，或整合有权利要求 1所述重组表达载体的以下可操作性相连的元件：启动子、β球蛋白基因内含 子、人β-NGF基因、内部核糖体进入位点序列和筛选标记基因的细胞，并进 行培养；

（3）收集培养基并纯化细胞分泌出的人β-NGF。