[发明专利]一种海胆黄多糖荧光结合物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种海胆黄多糖荧光结合物，其特征在于是海胆黄多糖分子中葡萄糖残基上的羟基与异硫氰酸荧光素共价结合，多糖分子中葡萄糖残基修饰率为0.1%～10%，即每10～1000个葡萄糖残基结合1分子的异硫氰酸荧光素。

2.如权利要求1所述的海胆黄多糖荧光结合物，其特征在于海胆黄多糖荧光结合物中多糖分子中葡萄糖残基修饰率为0.5%～1.0%，即每100～200个葡萄糖残基结合1分子的异硫氰酸荧光素。

3.如权利要求1或2所述的海胆黄多糖荧光结合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）将海胆黄多糖无水情况下溶解于二甲基亚砜中，加入异硫氰酸荧光素，使海胆黄多糖与异硫氰酸荧光素质量比为50∶1～5∶1或海胆黄多糖分子葡萄糖残基与异硫氰酸荧光素摩尔比为120∶1～12∶1，然后按每10ml反应体系分别加入吡啶50～1500μl、二丁基锡二月桂酸1～1000μl，避光于60℃～95℃下反应1h～8h；

（2）反应结束后，冷却至室温，加入4～6倍体积的无水乙醇醇沉，离心收集沉淀并真空干燥，层析纯化，然后冷冻干燥得海胆黄多糖荧光结合物。

4.如权利要求3所述的海胆黄多糖荧光结合物的制备方法，其特征在于步骤（1）中所述的海胆黄多糖与异硫氰酸荧光素质量比为25∶1～8∶1或海胆黄多糖分子葡萄糖残基与异硫氰酸荧光素摩尔比为60∶1～20∶1。

5.如权利要求3所述的海胆黄多糖荧光结合物的制备方法，其特征在于步骤（1）中所述的吡啶按每10ml反应体系加入100-500μl，即其终浓度为1%～5%（v/v）。

6.如权利要求3所述的海胆黄多糖荧光结合物的制备方法，其特征在于步骤（1）中所述的二丁基锡二月桂酸按每10ml反应体系加入5-100μl，即其终浓度为0.05%～0.1%（v/v）。

7.如权利要求3所述的海胆黄多糖荧光结合物的制备方法，其特征在于步骤（2）中所述的层析纯化采用的方法为超滤或凝胶过滤柱层析纯化。

8.如权利要求3所述的海胆黄多糖荧光结合物的制备方法，其特征在于步骤（2）中所述的无水乙醇加入量为5体积倍。

9.如权利要求3所述的海胆黄多糖荧光结合物的制备方法，其特征在于步骤（2）中所述的醇沉温度为4℃，时间为12h。

10.如权利要求1或2所述的海胆黄多糖荧光结合物在海胆黄多糖的药代动力学、作用机制研究及质量标准制定中的应用。