[发明专利]一种抗大豆胰蛋白酶抑制剂抗体、制备方法及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及抗体领域，特别是涉及抗大豆胰蛋白酶抑制剂抗体、制备方法及其用途。 

背景技术

近年来，我国渔业生产发展迅速，其中，水产品加工业已成为我国渔业生产中发展速度最快、经济社会效益十分显著的支柱产业。在水产加工品中，鱼糜制品因其食用方便、卫生、营养价值高等特点而广受消费者的青睐。但是，随着鱼糜制品生产企业的不断增加，产品良莠不齐的情况已开始出现。最值得关注的是在鱼浆原料中添加过量大豆蛋白替代鱼肉蛋白，以次充好，损害消费者权益的情况已开始出现。由于大豆蛋白中存在未完全灭活的大豆胰蛋白酶抑制剂、致敏蛋白等成分，对人体健康存在一定危害，因此有必要对鱼糜制品中大豆蛋白的添加量进行明确而有效的控制和规范。 

对大豆蛋白添加量的规范依赖于准确的定量检测方法。但目前国内尚无检测鱼糜制品原料及产品中大豆蛋白含量的方法。这是由于，一方面食品生产监管单位和鱼糜制品生产企业尚未认识到该项工作的重要性和必要性；另一方面，鱼糜制品加工过程中多种蛋白的混合以及高温处理会改变蛋白的结构及理化特性，增加了检测的难度。                                                                                                                                

发明内容

本发明的目的之一是提供一种抗大豆胰蛋白酶抑制剂特异性抗体。 

为实现上述目的，提供一种制备方法：将纯化的大豆胰蛋白酶抑制剂STI经过高温处理后免疫BALB/c小鼠，优选纯化的大豆胰蛋白酶抑制剂STI经过100-120 ^oC处理10-30 min；经细胞融合，筛选获得能分泌抗大豆胰蛋白酶抑制剂单克隆抗体的细胞株，经细胞培养获得抗体。 

还包括将获得的单克隆抗体通过Protein G Sepharose亲和柱进行纯化的步骤。 

本发明的另外一个目的是提供一种抗大豆胰蛋白酶抑制剂抗体的制备方法。包括如下步骤：将纯化的大豆胰蛋白酶抑制剂STI经过高温处理后免疫BALB/c小鼠，优选纯化的大豆胰蛋白酶抑制剂STI经过100-120 ^oC处理10-30 min；经细胞融合，筛选获得能分泌抗大豆胰蛋白酶抑制剂单克隆抗体的细胞株，经细胞培养获得抗体。 

还包括将获得的单克隆抗体通过Protein G Sepharose亲和柱进行纯化的步骤。 

本发明另一个目的是提供一种抗大豆胰蛋白酶抑制剂抗体的用途。一种用于检测鱼糜制品中大豆蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：将待检样品用提取液抽提后，以制备的生物素标记的所述抗STI单克隆抗体进行Western blot检测分析。所述提取液为含有0.1 mmol/L DTT的6-8 mol/L尿素。 

所述生物素标记的所述抗STI单克隆抗体是将所述抗STI单克隆抗体经脱盐处理后，与生物素混匀，于冰上孵育得到。 

在大豆蛋白中，大豆胰蛋白酶抑制剂（Soybean Trypsin Inhibitor，STI）占大豆总蛋白含量的6 %左右，STI由于其良好的热稳定性和在大豆蛋白中所占的高比例，将其作为一个检测鱼糜制品中大豆蛋白添加量的标志物是切实可行的。 

本发明的其中一个实施例用于验证本发明抗STI抗体用于鱼糜制品中大豆蛋白检测的高灵敏度。说明本发明检测方法的灵敏度高，可实现对0.025 %及以上的大豆蛋白添加量的准确检出。 

同时，另外一个实施例验证了本发明的抗STI抗体用于市售鱼糜制品中大豆蛋白的检测，验证了本发明的抗STI抗体用于鱼糜制品中大豆蛋白检测的准确性。 

本发明的抗STI抗体用于检测鱼糜制品中大豆蛋白含量，灵敏度高，特异性好，准确性高，方法简便快捷。 

附图说明

图1A. 纯化STI的SDS-PAGE电泳图，图1B抗STI单克隆抗体的特异性分析电泳图； 

图2. 纯化的STI对胰蛋白酶的抑制效果图；

图3. 抗STI单克隆抗体的纯化电泳图；

图4. 不同大豆蛋白含量的鱼糜制品中大豆蛋白检测的免疫印迹结果图；

图5. 市售鱼糜制品中大豆蛋白检测的免疫印迹结果图。

具体实施方式