[发明专利]一种丝素软骨复合体义耳及其制备方法

权利要求书

1.一种丝素软骨复合体义耳，其特征在于，采用丝素复合物作支撑材料，以软骨细胞作为外层，制成丝素软骨复合体义耳，所述的丝素蛋白重量/体积浓度为6-20％。

2.按权利要求1所述的丝素软骨复合体义耳，其特征在于，所述的丝素蛋白重量/体积浓度为6-12％。

3.按权利要求1所述的丝素软骨复合体义耳，其特征在于，所述的丝素蛋白重量/体积浓度为10％。

4.按权利要求1所述的丝素软骨复合体义耳，其特征在于，所述的丝素软骨复合体义耳是正常耳廓结构。

5.权利要求1所述的丝素软骨复合体义耳的制备方法，其特征在于，其包括步骤：

1)制备丝素蛋白

采用废桑蚕生丝在NaHCO3水溶液中脱胶，将脱胶丝溶于LiBr水溶液中，溶解，过滤，除去杂质，得丝素蛋白盐溶液，用去离子水透析除去溶液中的LiBr，得丝蛋白，再浓缩，PEG透析，丝素蛋白溶液离心去除杂质，留上清液，得重量/体积浓度为6-20％的丝素蛋白；

2)制备丝素蛋白支架

用制得的丝素蛋白溶液与正丁醇混合，搅拌后，放入-20℃冰箱24小时，室温条件下，制得丝素蛋白多孔支架；去离子水清洗去除残存正丁醇，制得不同孔径尺寸的多孔丝素蛋白多孔支架；

3)软骨细胞分离和细胞培养

采用获得的无菌成年雄性SD大鼠关节软骨，先后采用胰蛋白酶EDTA消化(GIBCO，0.25％trypsin)，用II型胶原酶消化后，过滤，离心，重悬细胞，最后接种于悬浮瓶中培养，隔天换液；

4)软骨细胞增殖和转染

传代软骨细胞进行慢病毒转染；

5)丝素蛋白膜和软骨细胞体外培养

转染后，软骨细胞进行培养和传代，然后种植在多孔丝素蛋白上，将丝素蛋白膜与软骨细胞体外培养4周；制得丝素软骨复合体义耳材料。

6.按权利要求5所述的方法，其特征在于，所属步骤1)的NaHCO3为0.5wt％；所述LiBr水溶液为9.3mol/L。

7.按权利要求5所述的方法，其特征在于，所属步骤2)的丝素蛋白溶液与正丁醇以1∶1混合。

8.按权利要求5所述的方法，其特征在于，所属步骤3)的悬浮瓶中培养成分含有高糖DMEM+15％胎牛血清。

9.权利要求1所述的丝素软骨复合体义耳在制备小耳畸形的耳廓再造材料中的应用。