[发明专利]高表达达托霉素的菌株及其筛选方法

权利要求书

1.一种高表达达托霉素的菌株，其分类命名为玫瑰孢链霉菌（Streptomyces roseosporus)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.6899。

2.一种高表达达托霉素的菌株，其分类命名为玫瑰孢链霉菌（Streptomyces roseosporus)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.7014。

3.一种高表达达托霉素的菌株，其分类命名为玫瑰孢链霉菌（Streptomyces roseosporus)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.7015。

4.一种高表达达托霉素的菌株的筛选方法，包括如下步骤：

（1）筛选具有利福平和/或庆大霉素抗性的玫瑰孢链霉菌菌株；

（2）从具有利福平和/或庆大霉素抗性的玫瑰孢链霉菌菌株中筛选高表达达托霉素的菌株。

5.根据权利要求4所述的高表达达托霉素的菌株的筛选方法，其特征在于：筛选具有利福平和/或庆大霉素抗性的玫瑰孢链霉菌菌株的出发菌株为玫瑰孢链霉菌ATCC 31586，或者是经过诱变处理的玫瑰孢链霉菌菌株。

6.根据权利要求4所述的高表达达托霉素的菌株的筛选方法，其特征在于：具体步骤包括：

1）将玫瑰孢链霉菌孢子悬液或者经过诱变处理后的玫瑰孢链霉菌孢子悬液涂布于含有利福平和/或庆大霉素的固体平板，培养，筛选出抗利福平和/或庆大霉素的玫瑰孢链霉菌突变株；

2）分别挑选抗利福平和/或庆大霉素的玫瑰孢链霉菌突变株单菌落，进行摇瓶发酵并检测达托霉素含量，筛选得到高表达达托霉素的菌株。

7.根据权利要求6所述的高表达达托霉素的菌株的筛选方法，其特征在于：所述的玫瑰孢链霉菌孢子悬液中，孢子浓度为10⁵-10⁶个/mL；所述的固体平板为高氏一号培养基；所述的培养为在30℃暗室培养5~7天。

8.根据权利要求6所述的高表达达托霉素的菌株的筛选方法，其特征在于：固体平板中含有利福平和/或庆大霉素的量为：利福平的浓度为0.4~1.8μg/mL，或者庆大霉素的浓度为0.4~1.1μg/mL，或者庆大霉素的浓度为0.1~1.0μg/mL，同时利福平的浓度为0.14~1.4μg/mL。

9.根据权利要求6所述的高表达达托霉素的菌株的筛选方法，其特征在于：所述的摇瓶发酵是将挑选的单菌落移至种子培养基，放大培养后转接至发酵培养基；所述的检测达托霉素含量的方法为先用HPLC外标法检测，再用牛津杯法进一步验证。

10.采用权利要求4-9中任一项所述的方法筛选得到的菌株，所述的菌株生产达托霉素的产量在59.86mg/L以上。