[发明专利]一种用磁性微球固定化米糠谷氨酸脱羧酶制备γ-氨基丁酸的方法

权利要求书

1.一种用磁性微球固定化米糠谷氨酸脱羧酶制备γ-氨基丁酸的方法，其特征是将米糠用酶提取液提取出谷氨酸脱羧酶，与制备好的磁性壳聚糖微球进行微粒反应，得到磁性固定化谷氨酸脱羧酶；将此固定化酶与反应液混合，加入0.01-0.05mol/L的谷氨酸钠作为底物，摇床反应得到γ-氨基丁酸制备液，具体工艺如下：

(1)提取谷氨酸脱羧酶：新鲜米糠加入酶提取液，提取谷氨酸脱羧酶；

(2)磁性壳聚糖微球的制备：0.5g磁性纳米微粒与20mL2.5％的壳聚糖乙酸溶液混合，在搅拌下缓慢加入到80mL液体石蜡和4mL Span-80混合溶液中，常温搅拌30min，加入10mL8％的戊二醛，40℃搅拌1h，再用1mol/LNaOH溶液调pH至9-10，70℃搅拌2h，用磁铁吸出微球，并先后用石油醚、丙酮、蒸馏水反复洗涤，于60℃下真空干燥；

(3)固定谷氨酸脱羧酶：0.05mol/LPBS缓冲液浸泡磁性壳聚糖微球12h，使其充分溶胀；加入戊二醛进行交联，用PBS缓冲液反复洗涤磁性微球；再加入一定浓度的酶液进行固定，用PBS缓冲液反复洗涤磁性微球；

(4)制备γ-氨基丁酸：将固定化酶与反应液混合，加入0.01-0.05mol/L的谷氨酸钠作为底物，摇床反应得到γ-氨基丁酸制备液。

2.根据权利要求1所述的一种磁性微球固定化米糠中谷氨酸脱羧酶制备γ-氨基丁酸的方法，其特征在于所述的磁性纳米微粒指的是具有生物活性的磁性纳米微粒，其粒径分布均匀，平均粒径为20nm。

3.根据权利要求1所述的一种磁性微球固定化米糠中谷氨酸脱羧酶制备γ-氨基丁酸的方法，其特征在于所述的磁性壳聚糖微球固定谷氨酸脱羧酶的反应的PBS缓冲液的pH值在4.8-6.4之间，戊二醛浓度为1％-3％，交联2-6h，固定1-5h。

4.根据权利要求1所述的一种磁性微球固定化米糠中谷氨酸脱羧酶制备γ-氨基丁酸的方法，其特征在于所述的固定化酶制备γ-氨基丁酸反应的反应液为pH5.6、0.01-0.05mo/LHAc-NaAc缓冲液，反应时间6-14h，底物浓度为0.01-0.05mol/L。