[发明专利]基于新型质量差异标签的生物体系中羧酸类信号分子的相对定量方法

权利要求书

1.一种由轻/重同位素对标记的质量差异标签分子对，所述质量差异标签分子对包含轻同位素标签分子和重同位素标签分子，其中这两种标签分子为式(I)所示：

其中：

结构部分A中，R₁是H或者含有1-3个碳原子的低级烷基，

R₂是H或者含有1-3个碳原子的低级烷基，

R₃是H或者含有1-3个碳原子的低级烷基，

其中R₁、R₂和R₃是相同的或不同的；

结构部分B中，Y是H或O，

[C]_n是含有1-8个碳原子的直链或支链脂肪烷基，或

是含有5-7个碳原子的环烷基；

结构部分C中，X是I，Br，Cl或F；

所述轻/重同位素对存在于所述结构部分A和B中的任一部分或两部分中，其中

结构部分A中的轻/重同位素对选自由H/D，¹²C/¹³C和¹⁴N/¹⁵N组成的组中的一种或多种，或者

结构部分B中的轻/重同位素对选自由H/D，¹²C/¹³C和¹⁶O/¹⁸O组成的组中的一种或多种。

2.根据权利要求1所述的质量差异标签分子对，其中所述结构部分A中，R₁、R₂和R₃是CH₃，所述结构部分B是C₂H₄，所述结构部分C中的X是Br；其中的轻/重同位素对是H/D，存在于所述结构部分A中。

3.一种合成(2-溴乙基)三甲基溴化铵(BETA)的9氘代同位素标记的标签分子D₉-BETA的方法，所述方法包括将D₉-三甲基胺在干燥甲醇作用下，于干冰-丙酮浴中与1，2-二溴乙烷反应，待反应混合物恢复至室温后，在室温搅拌2天，形成白色固体，纯化得到(2-溴乙基)三甲基溴化铵的9氘代同位素标记的标签分子D₉-BETA。

4.一种基于权利要求1或2的质量差异标签分子对定量生物样品体系中羧酸类信号分子的相对含量的方法，所述方法包括下述步骤：

(1)分别称取等质量的待对比其中羧酸类信号分子含量的生物材料，分为对照组样品和处理组样品；

(2)将步骤(1)的对照组样品和处理组样品分别用适当的有机溶剂提取，离心后取上清液，室温下氮气吹干；

(3)将步骤(2)的产物分别复溶于乙腈，依次加入三乙胺作为缚酸剂，对照组样品与权利要求1或2所述的轻同位素标签分子进行衍生化反应，处理组样品与权利要求1或2所述的重同位素标签分子进行衍生化反应，将反应产物分别用氮气吹干；

(4)将步骤(3)的产物分别复溶于水，合并复溶后的溶液，上样至预先活化和平衡好的阳离子交换柱，经淋洗、洗脱，将洗脱液用氮气吹干；

(5)将步骤(4)的洗脱产物用含甲酸的乙腈溶液复溶，过滤，在正离子模式下进行液相色谱-串联质谱LC-MS/MS分析；

(6)按式(II)计算对照组样品和处理组样品中羧酸类信号分子的相对含量：

A1/A2＝C1/C2(II)

其中：

A1表示由轻同位素标签分子标记的对照组样品中羧酸类信号分子标记产物的峰面积；

A2表示由重同位素标签分子标记的处理组样品中羧酸类信号分子标记产物的峰面积；

C1表示对照组样品中羧酸类信号分子的含量；

C2表示处理组样品中羧酸类信号分子的含量。