[发明专利]一种家蚕触角结合蛋白基因、蛋白及其制备方法

权利要求书

1.一种家蚕触角结合蛋白基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO:2所示。

2.权利要求1所述家蚕触角结合蛋白基因的扩增引物，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID NO:3~4所示。

3.一种家蚕触角结合蛋白的重组表达载体，其特征在于，由权利要求1所述家蚕触角结合蛋白基因插入到原核表达载体pET-32a的多克隆位点构建而成。

4.一种基因工程菌，其特征在于，含有权利要求3所述的家蚕触角结合蛋白的重组表达载体。

5.根据权利要求4所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌为E.coli BL21。

6.一种家蚕触角结合蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）将权利要求1所述的家蚕触角结合蛋白基因插入到原核表达载体的多克隆位点，构建成重组表达载体，重组表达载体导入宿主菌，构建成基因工程菌，培养基因工程菌，并用IPTG诱导表达蛋白，离心收集菌体，经细胞破碎、离心后收集上清；

（2）收集的上清经纤维素膜过滤除去杂质后，过镍离子亲和层析柱，用梯度浓度的咪唑水溶液洗脱，收集咪唑浓度为80 mM时的洗脱液，即得到家蚕触角结合蛋白。

7.根据权利要求6所述的家蚕触角结合蛋白的制备方法，其特征在于，所述培养基因工程菌的培养基为含有Amp抗生素的LB培养基，培养条件是220rpm摇床37℃培养。

8.根据权利要求6所述的家蚕触角结合蛋白的制备方法，其特征在于，所述IPTG的浓度为0.5mM，收集菌体前的离心速率为1000rmp。

9.根据权利要求6所述的家蚕触角结合蛋白的制备方法，其特征在于，所述细胞破碎具体步骤为：收集的菌体用pH 7.4的PBS洗涤三次，冰浴条件下以200W的功率超声破碎两次，每次以超声1s停2s的方式循环共30min；收集上清前的离心条件为12000rmp离心10min。

10.根据权利要求6所述的家蚕触角结合蛋白的制备方法，其特征在于，所述纤维素膜的孔径为0.45μm。