[发明专利]一种家蚕触角结合蛋白基因、蛋白及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种家蚕触角结合蛋白基因、蛋白及其制备方法。 

背景技术

家蚕为鳞翅目昆虫中少数的益虫，家蚕触角结合蛋白（Antennal binding protein, ABP）是气味结合蛋白（Odorant binding proteins, OBPs）的一个亚类，在昆虫和外界环境进行化学信息交流过程中起着重要作用，对昆虫的觅食、求偶、繁殖都具有重要意义。灵敏的嗅觉对于昆虫的正常生存和适应环境不可或缺，昆虫嗅觉系统是一个高度专一、极其灵敏的化学监测器，能从成千上万种不同气味中识别出低达几百万分之一的某些特异性气味物质。昆虫感受到的气味物质多为脂溶性的小分子化合物，这些小分子物质通过触角上皮细胞间的孔道扩散到达触角感器淋巴液，而触角感器是亲水性的液体，外界亲脂性分子不能直接穿过这些亲水性的液体到达嗅觉神经树突末梢，家蚕触角结合蛋白（ABP）可能在嗅觉神经树突周围液体中溶解并运输脂溶性气味化合物穿过亲水性液体。 

鳞翅目昆虫中包括了大量农业和林业上的重要害虫，如何有效防治害虫但不污染环境是当前生产中的关键问题 ，开展家蚕触角结合蛋白的研究不仅有利于指导蚕桑业的生产实践，也可以利用家蚕作为模式生物进行相关研究，将其成果积极应用于鳞翅目害虫的防治。 

现有技术对于触角结合蛋白的研究较少，张瑶等在“家蚕ABP与ABPX基因定位于表达分析”（昆虫学报，2012）一文中利用家蚕ABP基因（GenBank登录号：DQ311409）序列，通过RT-PCR方法获取了ABP基因序列，其位于第5染色体上，由3个外显子和1个内含子组成，外显子序列长度在47~450bp之间，内含子长度3482bp。但是对于家蚕触角结合蛋白的表达和纯化还未见报道，因为该蛋白的表达量非常低、且难于纯化。 

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明通过构建重组表达载体pET-32a-ABP，摸索诱导表达条件并成功得到大量重组目的蛋白，重组蛋白经镍离子亲和层析柱纯化及凝胶过滤层析等技术可以得到纯度较高的重组蛋白，为以后研究其三维结构和其在信号通路中的功能奠定了极其重要的基础。 

本发明具体技术方案如下： 

一种家蚕触角结合蛋白基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO:2所示。

上述家蚕触角结合蛋白基因的扩增引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO:3~4所示。 

一种家蚕触角结合蛋白的重组表达载体，是由上述家蚕触角结合蛋白基因插入到原核表达载体pET-32a的多克隆位点构建而成。 

一种基因工程菌，其含有上述家蚕触角结合蛋白的重组表达载体。 

优选地，所述基因工程菌为E.coli BL21。 

一种家蚕触角结合蛋白的制备方法，包括如下步骤： 

（1）将权利要求1所述的家蚕触角结合蛋白基因插入到原核表达载体的多克隆位点，构建成重组表达载体，重组表达载体导入宿主菌，构建成基因工程菌，培养基因工程菌，并用IPTG诱导表达蛋白，离心收集菌体，经细胞破碎、离心后收集上清；

（2）收集的上清经纤维素膜过滤除去杂质后，过镍离子亲和层析柱，用梯度浓度的咪唑水溶液洗脱，收集咪唑浓度为80 mM时的洗脱液，即得到家蚕触角结合蛋白。

优选地，所述培养基因工程菌的培养基为含有Amp抗生素的LB培养基，培养条件是220rpm摇床37℃培养。 

优选地，所述IPTG的浓度为0.5mM，收集菌体前的离心速率为1000rmp。 

优选地，所述细胞破碎具体步骤为：收集的菌体用pH 7.4的PBS洗涤三次，冰浴条件下以200W的功率超声破碎两次，每次以超声1s停2s的方式循环共30min；收集上清前的离心条件为12000rmp离心10min。 

优选地，所述纤维素膜的孔径为0.45μm。 

本发明具有以下有益效果：