[发明专利]一种筛选酸性浸矿体系中新基因的宏基因组芯片及其筛选方法

权利要求书

1.一种筛选酸性浸矿体系中新基因的宏基因组芯片，其特征在于，是由以下方式构建的：

利用德兴酸性矿坑废水中微生物群落的总DNA构建大片段的宏基因组文库，以宏基因组文库中提取的7776个fosmid质粒为探针，将探针通过基因芯片点样仪打印在玻片表面，打印后的宏基因组芯片在室温下干燥过夜，最后使用紫外交联仪照射下进行交联即可。

2.如权利要求1所述的宏基因组芯片，其特征在于：构建具体包括以下步骤：

采用0.2μm的尼龙膜过滤酸性浸矿体系中的酸性浸出液，得到生物质富集物，液氮研磨法提取微生物群落总DNA，然后利用200μl的小枪头进行切割，将总DNA修剪成40-50Kb的随机的大片段；通过DNA的末端修饰使其末端成为两条链平齐的钝末端，利用DNA快速连接酶将DNA大片段与CopyControl pCC1FOS Vector质粒连接起来构建重组的fosmid质粒；然后将重组的fosmid质粒转化到EPI300-T1^R Plating大肠杆菌感受态细胞；将转化后的大肠杆菌细胞液均匀地涂布在含有氯霉素的LB培养基上，过夜培养，挑取阳性克隆子构成含有7776个克隆子的宏基因组文库；每个克隆子中都含有一段40-50Kb的插入DNA片段；

利用诱导剂诱导宏基因组文库中的克隆子，使重组fosmid质粒在细胞中的拷贝数达到至少50个，然后提取宏基因组文库中每个克隆子的fosmid质粒，测定质粒的浓度，调节其浓度为50ng/μl储存；将10μl的fosmid DNA与40%的二甲基亚砜按体积1:1的比例混合，用芯片点样仪，在相对湿度为50-55%的条件下将fosmid DNA样品打印在硅化玻片表面；样品点之间的距离为250μm，打印好的芯片室温干燥过夜后紫外照射使核酸分子与玻片交联固定。

3.如权利要求2所述的宏基因组芯片，其特征在于：将探针在芯片上排列成18行36列的亚矩阵，共排列26个亚矩阵，每个探针在芯片上有2个阵列重复。

4.如权利要求1所述的宏基因组芯片，其特征在于：所述的酸性浸矿体系为江西德兴铜矿的酸性浸矿体系。

5.利用权利要求1-4任一项所述的宏基因组芯片筛选浸矿体系微生物群落中的新基因的方法，其特征在于，包括以下步骤：PCR扩增待筛选目标基因并进行荧光标记：将经标记后的PCR产物与宏基因组芯片杂交，获取阳性杂交信号数据，通过PCR验证，然后通过测序对应宏基因组文库中的克隆子得到目标基因的完整序列信息。