[发明专利]血清学H-Y抗原基因DBY抗体制备及其XY精子免疫分选法有效
| 申请号： | 201310028775.5 | 申请日： | 2013-01-25 |
| 公开（公告）号： | CN103114079A | 公开（公告）日： | 2013-05-22 |
| 发明（设计）人： | 王乃东;谭庆辉;薛立群;袁安文;许道军 | 申请（专利权）人： | 湖南农业大学 |
| 主分类号： | C12N9/14 | 分类号： | C12N9/14;C07K16/40;G01N33/569;C12N5/076 |
| 代理公司： | 长沙市融智专利事务所 43114 | 代理人： | 袁靖 |
| 地址： | 410128 *** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 血清学 抗原 基因 dby 抗体 制备 及其 xy 精子 免疫 分选 | ||
1.一种DBY重组抗原肽，其特征在于，包含以下三段蛋白序列：
DBY-Ⅰ
KSSDNQNGGGNTESKGRYIPPHLRNRETSKGVCDKDSSGWSCSKDKDAY
SSFGSRDSRGKPNYFSDRGSGSRGRFDDHGRNDYDGIGGRDRTGFGKFER
SGHSRWSDRSDEDDWSK
DBY-Ⅱ
SIHGDRSQKDREEALHQFRSGRKPILVAT
DBY-Ⅲ
SRGRSKSRFSGGFGARDYRQSSGSANAGFNSNRANSSRSSGSSHNRGFGG
GGYGGFYNNDGYGGNYNSQAVDWWGN。
2.一种DBY重组抗原肽，其特征在于，蛋白序列如下：
KSSDNQNGGGNTESKGRYIPPHLRNRETSKGVCDKDSSGWSCSKDKDAY
SSFGSRDSRGKPNYFSDRGSGSRGRFDDHGRNDYDGIGGRDRTGFGKFER
SGHSRWSDRSDEDDWSKPLPACTSIHGDRSQKDREEALHQFRSGRKPILV
ATAVAAGSSRGRSKSRFSGGFGARDYRQSSGSANAGFNSNRANSSRSSGS
SHNRGFGGGGYGGFYNNDGYGGNYNSQAVDWWGN。
3.血清学H-Y抗原基因DBY抗体制备方法，其特征在于，
以权利要求2所述的重组抗原肽为抗原免疫试验动物，获得多克隆抗体。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，
所述的重组抗原肽的制备过程如下：
提取雄性小鼠脑组织中总RNA，再用逆转录合成cDNA第一链，设计特异性引物
，将3段DBY抗原肽核酸片段扩增出来；将抗原肽核酸片段分别克隆进入pMD18-T载体，筛选阳性质粒，经双酶切后，将DBY1、DBY2和DBY3核酸片段用T4连接酶连接后克隆入pET-32a表达载体中，筛选出阳性克隆质粒
pET-32a-DBY，然后进行原核表达，获得的DBY重组抗原肽进行纯化。
5.XY精子免疫分选法，其特征在于，以权利要求3或4制备的抗体与动物精子进行免疫反应，来鉴别或者分离X和Y精子。
6.根据权利要求5所述的免疫分选法，其特征在于，所述的动物精子包括小鼠的精子。
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