[发明专利]一种抗癌药物的新型筛选方法

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体的说，涉及一种抗癌药物的新型筛选方法。

背景技术

恶性肿瘤是一大类严重威胁人类生命和健康的疾病。化疗作为全身性的治疗手段，始自1948年将叶酸拮抗剂作为抗肿瘤药物，引入到白血病的治疗中，在恶性肿瘤的综合治疗中具有不可替代的地位，但由于目前药物种类有限，且出现耐药现象，因此目前化疗的疗效仍不理想，仍需我们继续寻找更为有效的药物品，现有的抗癌药物的筛选方法有许多，如：

1、人体肿瘤细胞集落形成测定(Human Tumor Cell Cloning Assay，HTCA)，该法的优点：敏感，直接评价细胞增殖死亡。而其缺点实：用于临床标本检测率低、周期长、集落计数繁琐。

2、鉴别染色法(Differential Staining Cytotoxicity Assay，DISC)，该方法不依赖细胞的分裂。但该法却需人工计数细胞，易受人为误差的影响。

3、核素前体掺入实验(³H-Tdr Assay)，该法所需细胞数较少因此可使用针吸标本，但该法仅测定标本中5％～10％的细胞，胸腺嘧啶及正常细胞均会影响测定结果，且存在放射性污染。

4、四唑盐染色法(MTT Assay)，MTT法可在较短时间内进行大量标本的分析。但有些因素亦可影响其结果：二甲亚砜的质量，MTT形成的甲臜晶体可在数小时内褪色，某些受到致命打击的细胞仍可使MTT转变为甲臜。

5、三磷酸腺苷生物发光法(ATP Luminescence Assay)，该法利用荧光素一荧光素酶试剂定量测定细胞内ATP水平，从而反映化疗药物对肿瘤细胞的杀伤能力，在肿瘤细胞数量很少的时候也能检测到较高数值，具有高敏感性。

6、总蛋白染色法(Sulforhodamine B Assay，SRB)，是一种蛋白质结合染料，可与细胞内生物大分子中的碱性氨基酸结合，在515nm的吸收度读数与细胞数呈良好的线性关系。

7、荧光法(Fluorometric Microculture Cytotoxicity Assay，FMCA)，该法利用活细胞水解双醋酸根荧光素后可以发出荧光，通过测定荧光的强度即可反映培养体系中活细胞的数目。但有时对照组读数太低，导致实验失败。

8、胶原凝胶液滴植入培养法(CD-DST)，该法具有癌细胞培养成功率高、药敏试验结果准确等优点。但该法价格较贵，目前仅在日本广泛应用。

但是目前所有药敏实验仅能筛选出有效抑制肿瘤生长的药物，而无法了解所筛选出的药物的抗癌作用机制，若不了解药物作用机制，则大大影响将其应用于临床的研究；若要了解药物作用机制，尚需进行其他实验进行研究，消耗一定的时间和经费。

而据文献所知硝基化酪氨酸可通过微管蛋白酪氨酸连接酶整合至微管蛋白，形成硝基化酪氨酸微管蛋白，这会显著地改变微管的结构，引起细胞的变形、黏附能力的下降以及胞内运输障碍，最终会导致细胞调亡和器官功能丧失。(参见：Fukushima N，Furuta D，Hidaka Y，Moriyama R，Tsujiuchi T.Post-translational modifications of tubulin in the nervous system[J].JNeurochem.2009May；109(3)：683-93.)硝基化酪氨酸微管蛋白能抑制头颈鳞癌细胞的生长，而TTLL12可以抑制硝基化酪氨酸微管蛋白的生成，从而调节头颈鳞癌细胞的生长，TTLL12增多，会导致硝基化酪氨酸微管蛋白的减少，导致癌细胞逃避了硝基化酪氨酸微管蛋白对其的打击，可继续增殖，因此TTLL12具有潜在癌基因的功能。(参见：李雅冬，张劲松等人，微管蛋白酪氨酸连接酶类似物12通过干扰微管蛋白酪氨酸硝基化促进Hep-2细胞生长[J]，中国生物化学与分子生物学报，2012，28(8)：30-34.)

现有技术的缺点：目前所有药敏实验仅能筛选出有效抑制肿瘤生长的药物，而无法了解所筛选出的药物的抗癌作用机制，若不了解药物作用机制，则大大影响将其应用于临床的研究；若要了解药物作用机制，尚需进行其他实验进行研究，消耗一定的时间和经费。

发明内容

为解决以上技术问题，本发明的目的在于提供一种能大规模筛选出有效抑制肿瘤生长的、了解其抗癌作用机制的抗癌药物的新型筛选方法。

本发明目的是这样实现的：

一种抗癌药物的新型筛选方法，其关键在于包括以下步骤：