[发明专利]包含一种或多种可组合的突变的芽孢杆菌属枯草杆菌蛋白酶

说明书

本申请为2009年11月10日提交的，发明名称为“包含一种或多种可组合的突变的芽孢杆菌属枯草杆菌蛋白酶”的PCT申请PCT/US2009/063837的分案申请，所述PCT申请进入中国国家阶段的日期为2011年5月9日，申请号为200980144526.4。

本申请要求2008年11月11日提交的美国临时专利申请61/113,545和2009年6月19日提交的美国临时专利申请61/218,802的优先权，所述临时专利申请在此引入作为参考。

发明领域

本发明提供改造的蛋白酶变体。具体而言，该蛋白酶变体包含在选定的表面位置处的可组合突变，所述突变影响酶的电荷和/或疏水性以增强得到的变体酶在选择性应用中的至少一种需要的特性。也提供了包含蛋白酶变体的组合物，以及使用该组合物的方法。

发明背景

丝氨酸蛋白酶是羰基水解酶的亚类，所述羰基水解酶包含多种具有广泛的特异性和生物学功能的酶类。在枯草杆菌蛋白酶上已经进行了许多研究，主要是由于它们在清洁和喂饲应用中的有用性。其他研究集中于可能减少这些酶在多种应用中的功能性的不利环境条件上(例如，暴露于氧化剂、螫合剂、极端的温度和/或pH)。然而，本领域仍需要能抵抗这些不利条件并保留本领域目前已知的那些酶系统的活性或者具有改善的活性的酶系统的需求。

发明概述

本发明提供改造的蛋白酶变体。具体而言，该蛋白酶变体包含在选定的表面位置处的可组合突变，所述突变影响酶的电荷和/或疏水性以增强得到的变体酶在选择性应用中的至少一种需要的特性。也提供了包含蛋白酶变体的组合物，以及使用该组合物的方法。

在一个实施方案中，该蛋白酶变体是具有蛋白水解活性的芽孢杆菌属(Bacillus)枯草杆菌蛋白酶的分离的枯草杆菌蛋白酶变体的成熟形式，并包含选自24、45、101、109、118、213和217位置的两个或多个位置的替换，其中所述位置通过对应于如SEQ ID NO：1所述的解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)枯草杆菌蛋白酶BPN’的氨基酸序列而进行编号。

在另一个实施方案中，该蛋白酶变体是具有蛋白水解活性的芽孢杆菌属枯草杆菌蛋白酶的分离的枯草杆菌蛋白酶变体的成熟形式，并包含选自24、45、101、109、118、213和217位置的两个或多个位置的替换，其中所述位置通过对应于如SEQ ID NO：1所述的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN’的氨基酸序列而进行编号，并且其具有大于或等于0.5的相对蛋白质表达水平性能指数(TCA PI)和/或去污活性性能指数(BMIPI)。

在另一个实施方案中，该蛋白酶变体是具有蛋白水解活性的芽孢杆菌属枯草杆菌蛋白酶GG36的分离的枯草杆菌蛋白酶变体的成熟形式，并包含选自S24Q、S24E、S24L、S24R、R45Q、R45E、R45L、S101Q、S101E、S101L、S101R、Q109E、Q109L、Q109R、G118Q、G118E、G118L、G118R、T213Q、T213L、T213R、T213E、L217Q和L217E的两个或多个位置的两个或多个替换，其中所述位置通过对应于如SEQ ID NO：1所述的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN’的氨基酸序列而进行编号。

在另一个实施方案中，该蛋白酶变体是具有蛋白水解活性的芽孢杆菌属枯草杆菌蛋白酶GG36的分离的枯草杆菌蛋白酶变体的成熟形式，并包含选自S24Q、S24E、S24L、S24R、R45Q、R45E、R45L、S101Q、S101E、S101L、S101R、Q109E、Q109L、Q109R、G118Q、G118E、G118L、G118R、T213Q、T213L、T213R、T213E、L217Q和L217E的两个或多个位置的两个或多个替换，其中所述位置通过对应于如SEQ ID NO：1所述的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN’的氨基酸序列而进行编号，并且其具有大于或等于0.5的相对蛋白质表达水平性能指数(TCA PI)和/或去污活性性能指数(BMI PI)。