[发明专利]一种共表达葡萄糖淀粉酶和α-淀粉酶的重组毕赤酵母菌株及其构建方法，以及混合酶制剂

权利要求书

1.一种共表达葡萄糖淀粉酶和α-淀粉酶的重组毕赤酵母菌株，其特征在于，所述重组毕赤酵母菌株同时含有来自微小毛霉菌的葡萄糖淀粉酶基因（Gla）和α-淀粉酶基因（Amy），其基因序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

2.根据权利要求1所述的重组毕赤酵母菌株，其特征在于，所述重组毕赤酵母菌株能够同时分泌表达葡萄糖淀粉酶和α-淀粉酶。

3.一种权利要求1所述的重组毕赤酵母菌株的构建方法，其特征在于，所述构建方法的步骤如下：

1）以微小毛霉菌基因组为模板，克隆得到葡萄糖淀粉酶（Gla）基因，其序列如SEQ ID NO.1所示，以pPIC9K为载体，构建重组表达载体pPIC9KGla，转入毕赤酵母KM71，得到重组毕赤酵母KM71/9KGla；

2）以微小毛霉菌基因组为模板，克隆得到α-淀粉酶（Amy）基因，其序列如SEQ ID NO.2所示，以pPICZα为载体，构建重组表达载体pPICZαAmy；

3）将所述重组表达载体pPICZαAmy转入重组毕赤酵母KM71/9KGla，通过抗生素筛选，得到同时含有葡萄糖淀粉酶基因和α-淀粉酶基因的重组毕赤酵母菌株KM71/9KGla-ZαAmy。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤1）中从微小毛霉菌基因组克隆所述葡萄糖淀粉酶（Gla）基因的上、下游引物序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤2）中从微小毛霉菌基因组克隆所述α-淀粉酶（Amy）基因的上、下游引物序列分别如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示。

6.一种混合酶制剂，其特征在于，所述混合酶制剂由权利要求1-2中任一项所述的共表达葡萄糖淀粉酶和α-淀粉酶的重组毕赤酵母菌株制备，包括葡萄糖淀粉酶和α-淀粉酶。

7.根据权利要求6所述的混合酶制剂，其特征在于，所述混合酶制剂的最适作用pH为4-5。

8.根据权利要求6所述的混合酶制剂，其特征在于，所述混合酶制剂的最适作用pH为5。

9.根据权利要求6所述的混合酶制剂，其特征在于，所述混合酶制剂的最适作用温度为60-80℃。

10.根据权利要求6所述的混合酶制剂，其特征在于，所述混合酶制剂的最适作用温度为70℃。