[发明专利]旋毛虫肌幼虫ES抗原基因疫苗及其制备方法有效
| 申请号： | 201310040669.9 | 申请日： | 2013-02-03 |
| 公开（公告）号： | CN103352047A | 公开（公告）日： | 2013-10-16 |
| 发明（设计）人： | 杨桂连;王春凤;杨文涛;刘高升;赵葛 | 申请（专利权）人： | 吉林农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/79 | 分类号： | C12N15/79;C12N15/12;A61K48/00;A61P33/00 |
| 代理公司： | 长春市东师专利事务所 22202 | 代理人： | 张铁生 |
| 地址： | 130118 吉林省*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 旋毛虫 幼虫 es 抗原 基因 疫苗 及其 制备 方法 | ||
1.旋毛虫肌幼虫重组43ku ES抗原基因的真核表达载体pVAXⅠ-43ku，它是在真核表达载体pVAXⅠ中插入了43ku基因，所述的43ku其碱基序列如序列表SEQID No.1所示。
2.旋毛虫肌幼虫重组45ku ES抗原基因的真核表达载体pVAXⅠ-45ku，它是在真核表达载体pVAXⅠ中插入了45ku基因，所述的45ku其碱基序列如序列表SEQID No.2所示。
3.旋毛虫肌幼虫ES抗原基因疫苗，它包括：重组质粒pVAXⅠ-43ku和pVAXⅠ-45ku，它们的碱基序列如序列表SEQID No.1和2所示。
4.根据权利要求3所述的旋毛虫肌幼虫ES抗原基因疫苗，其特征在于：VAXⅠ-43ku和pVAXⅠ-45ku的重量比为1∶1；
根据权利要求3或4所述的旋毛虫肌幼虫ES抗原基因疫苗，其特征在于：所述的pVAXⅠ-43ku和pVAXⅠ-45ku的浓度均为1μg/μL。
5.旋毛虫肌幼虫ES抗原基因疫苗制备方法，包括：
（1）制备旋毛虫肌幼虫总RNA，反转录为cDNA，并以cDNA为模板，用引物：
43ku -P1：5’-CGCGGTACCATGCGAATATACATTTTTCTTAG-3’
43ku -P2：5’-CGAGGATCCTTAGCTGTATGGGCAA-3’
45ku -P1：5’-CGCGGTACCATGAAACTCTTGCTTTTAACA-3’
45ku -P2：5’-GCGGATCCTTAGCCTTGCTTAGAGAG-3’
PCR方法分别扩增43ku、45ku ES抗原基因，43ku、45ku基因其碱基序列如序列表SEQID No.1、2所示；
（2）将43ku、45ku基因分别插入pVAXⅠ真核表达载体中，构建重组真核表达载体pVAXⅠ-43ku和pVAXⅠ-43ku；
（3）将两种重组真核表达载体分别转入E.coli DH5α中，接种于LB液体培养基，37℃，150-180 r/min摇床培养；
（4）从上述培养的E.coli DH5α中大量制备pVAXⅠ-43ku和pVAXⅠ-45ku，并调整二者浓度后混合。
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