[发明专利]一种促进地衣芽孢杆菌BL63516生长的发酵培养基及发酵培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种促进地衣芽孢杆菌BL63516生长的发酵培养基及发酵培养方法。

背景技术

发明专利92113318.9公开了一种地衣芽孢杆菌BL63516（保藏号：CGMCCNo.0183）制成的微生态制剂，即整肠生，可用于治疗成人急性、慢性腹泻及各种原因引起的肠道菌群失调症。1992年开始先后有整肠生胶囊和整肠生颗粒剂产品经国家药品监督管理局批准投放市场。经过20年的临床应用实践表明，整肠生具有较好的调整人体菌群失调的作用，市场、临床应用均未发现毒副作用及不良反应方面的相关报道。该专利提供的制备地衣芽孢杆菌BL63516原菌粉的技术方案是：菌种经pH6.0-7.8的营养肉汤培养基，37℃培养15-24小时，制成种子液；扩大培养时使用pH6.0-7.8的营养琼脂培养基，35-38℃培养48小时，制成菌苔液，离心获得菌泥，再按1:8的重量比加入无水碳酸钙，65-75℃脱水干燥制成原菌粉。

该技术出现在微生态制剂工业化的早期，菌泥产量低，生产周期长，工作量巨大。后经沈阳第一制药厂1998年技术改造将固态发酵法升级为液态深层发酵法，工业化水平得到了大幅提升，但依然使用用于一般细菌增菌培养的通用培养基，即营养肉汤培养基（Nutrient Broth），并未研发设计适合地衣芽孢杆菌BL63516专属培养基。

发明专利201010578718.0在液态深层发酵法的基础上，公开了地衣芽孢杆菌BL63516冻干菌种温度梯度复苏培养的方法。该专利提供的制备地衣芽孢杆菌BL63516原菌粉的技术方案是：菌种经pH7.0-7.4的营养肉汤培养基，恒温培养2-8小时，制成种子液；发酵罐扩大培养时使用pH7.0-7.4的营养肉汤培养基，温度37±1℃，罐压0.02-0.04MPa，培养12-36小时，制成发酵液，离心获得菌泥，再按1:3-7的比例加入无水碳酸钙，60±2℃脱水干燥制成原菌粉。

虽然他们都是针对地衣芽孢杆菌BL63516进行了一系列研究，但以上的发酵工艺及培养基配方设计上，均依然采用用于一般细菌增菌培养的通用培养基，即营养肉汤培养基（Nutrient Broth），都未研发设计适合地衣芽孢杆菌BL63516的专属培养基，且对该菌种都是采用一次配料、灭菌、批次发酵的工艺，在发酵过程中只对发酵温度和罐压进行着本领域技术人员所公知的干预控制，所以目前地衣芽孢杆菌BL63516发酵产物中，活菌数含量低，芽孢形成率不高，这一问题一直没有得到根本的解决。因此，研制开发一种促进地衣芽孢杆菌BL63516生长的发酵培养基及发酵培养方法一直是亟待解决的课题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种促进地衣芽孢杆菌BL63516生长的发酵培养基及发酵培养方法，通过调整培养基中菌种生长所需的碳源、氮源和无机离子的比例，控制整个发酵过程中各时段的温度、罐压、溶氧、pH等全方位指标，提高了地衣芽孢杆菌BL63516的萌发和生长速度，提高地衣芽孢杆菌BL63516活菌数和芽孢形成率。

本发明的目的是这样实现的：一种促进地衣芽孢杆菌BL63516生长的发酵培养基，包括牛肉粉或牛肉膏、蛋白胨、麦芽糊精、低聚半乳糖、NaCl和水，各组分质量百分比为：牛肉粉或牛肉膏1.0-2.5%、蛋白胨0.5-2.0%、麦芽糊精0.1-0.5%、低聚半乳糖0.1-0.3%、NaCl0.1-2.0%，余量为水，用NaOH调节pH为：6.5-9；优选各组分质量百分比为：牛肉粉或牛肉膏1.0-2.0%、蛋白胨0.7-1.7%、麦芽糊精0.1-0.4%、低聚半乳糖0.11-0.2%、NaCl0.3-1.5%，余量为水，用NaOH调节pH为7.5-8.5；所述蛋白胨为牛蛋白胨、大豆蛋白胨、胰蛋白胨、酪蛋白胨、鱼蛋白胨的一种或几种；一种促进地衣芽孢杆菌BL63516生长的发酵培养基的发酵培养方法，该方法包括以下步骤，

（1）将地衣芽孢杆菌BL63516的种子液接种于发酵培养基中进行液体发酵培养；

（2）选择种龄8-15小时的种子液进行接种，接种量为0.03-1.0%；