[发明专利]组织再生引导膜及其制备方法

权利要求书

1. 一种组织再生引导膜制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

前处理步骤，收集哺乳动物的腹膜，流动水洗涤及脱毛后采用流动水洗的机械法进行初步脱脂，再储存在0-4℃环境中备用；

去抗原处理步骤，依次采用酶处理工艺、碱处理工艺、酸处理工艺和高渗处理工艺对初步脱脂后备用的腹膜进一步脱脂，去除免疫原性；

胶原纤维收缩处理步骤，对经去抗原处理后的腹膜依次进行脱水、去除非亲水性物质和水洗处理，使腹膜的胶原纤维收缩，提升膜组织的致密度；

干燥步骤，将收缩处理后的腹膜平铺于培养皿表面，使腹膜的致密层接触培养皿，迅速转移至-60到-80℃冰箱中预冻1-8小时，再放入冻干机中冻干24-36小时后得到具有致密层和疏松层的可引导组织再生的胶原膜。

2. 如权利要求1所述的组织再生引导膜制备方法，其特征在于，在前处理步骤中，收集是的刚刚被宰杀的猪、牛或羊的腹膜。

3. 如权利要求1所述的组织再生引导膜制备方法，其特征在于，去抗原处理步骤中采用的酶处理工艺的具体操作为：将备用的腹膜先在质量比浓度为0.1%-3.0%且温度控制在30-40℃的脂肪酶中浸泡5-10小时，去除组织中的脂肪，然后再放入质量比浓度为0.2%-3%且温度控制在30-40℃的胰蛋白酶或胃蛋白酶或中性蛋白酶中浸泡10-24小时。

4. 如权利要求1所述的组织再生引导膜制备方法，其特征在于，去抗原处理步骤中采用的碱处理工艺的具体操作为：在2-8℃的温度条件下用无机碱性试剂进行碱处理，溶解和去除腹膜上的体毛和大部分具有免疫原性的蛋白聚糖和酶处理后残余的微量脂肪，并软化胶原纤维结构防止胶原变性，所述无机碱性试剂为质量比浓度为0.3-10%的氢氧化钠或氢氧化钾溶液，pH为13-14。

5. 如权利要求1所述的组织再生引导膜制备方法，其特征在于，去抗原处理步骤中采用的酸处理工艺具体操作为：在2-8℃的温度条件下，采用酸性试剂处理，发生酸不稳定的交联水解，去除对酸敏感的污染物和非胶原物质，且促使组织吸水膨胀，胶原纤维结构松开，胶原纤维结构进一步打开，胶原束变得松散，然后将材料进行水洗直至pH达到2.0到3.5范围，获得具有一个光滑面以及一个松散的纤维质面的腹膜组织，所述酸性试剂为质量比浓度为1-8%且pH为0.5-1.5的无机酸或有机酸，所述无机酸为盐酸或硫酸，所述有机酸为乳酸、柠檬酸或乙酸。

6. 如权利要求5所述的组织再生引导膜制备方法，其特征在于，去抗原处理步骤中的高渗处理工艺具体操作为：将腹膜组织置入pH为3.0-3.5，质量体积比为5g/L-10g/L的NaCl溶液中，将温度控制为2-8℃，搅拌处理4-18小时后用NaHCO₃溶液中和并用水冲洗，得到去抗原的天然腹膜组织。

7. 如权利要求1所述的组织再生引导膜制备方法，其特征在于，胶原纤维收缩处理步骤的具体操作如下：

脱水处理，将去抗原的腹膜组织置入丙酮或酒精溶液中，在脱色摇床上以60-80r/min的速度进行摇晃5-30分钟后，夹在两个医用不锈钢板中间通过抽真空进行干燥；

去除非亲水性物质处理，使用烃溶剂、链烷醇溶剂或醚溶剂中的一种或几种的混合物对脱水处理后的腹膜进行非亲水性物质萃取，同时去除组织中残留的微量脂肪；

水洗处理，去除非亲水性物质后，再将腹膜组织放入去离子水中，震荡处理3-5次，每次10-30分钟，直至样品变透明柔软。

8. 如权利要求1所述的组织再生引导膜制备方法，其特征在于，在干燥步骤后还进行交联处理步骤，将干燥处理后的胶原膜在80~120℃下高温交联12-36小时，即得到双层胶原基引导膜。

9. 如权利要求8所述的组织再生引导膜制备方法，其特征在于，交联处理步骤后，还进一步进行复合步骤，取两片交联处理后的双层胶原基引导膜，将其中一片双层胶原基引导膜经高温交联24小时处理，将该膜的疏松层朝上致密层朝下作为上层膜，另一片双层胶原基引导膜置于压片机中以10-30MPa的压力保压5-50小时后作为下层膜，然后将0.5%的胶原溶液涂覆在下层膜的疏松层外表面，将上层膜的致密层贴合于下层膜的疏松层外侧表面后进行冷冻及冻干，使两层结构紧密附着在一起，获得双层胶原基引导膜。

10. 一种组织再生引导膜，其特征在于，其采用如权利要求1~9中任一项所述的方法制备而得，具有致密层和疏松层，而且所述组织再生引导膜的成分主要包括质量百分比不低于90%的Ⅰ型胶原以及0.5-5%的Ⅲ型胶原。