[发明专利]组织再生引导膜及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物医用材料技术领域，具体涉及一种组织再生引导膜及其制备方法。

背景技术

在治疗重度牙周病方面已开始广泛应用组织再生引导膜（guided tissue regeneration，GTR），GTR膜材料可分为不可吸收膜材料和可吸收膜材料。

不可吸收的膜材料（如用聚四氟乙烯制备的GTR膜）由于必须进行二次手术取出，而给病人带来极大痛苦，并且因其无生物活性，不能用于较大缺损面积的再生，因此，市场上绝大多数不可降解吸收的膜材料基本已被淘汰。

目前，市场上可降解吸收的组织再生引导膜材料产品很少，并且都存在一些缺陷。由胶原蛋白制备的GTR膜，在体内降解后不会产生任何有害物质，生物相容性优于人工合成高分子聚合物，已逐渐成为制备GTR膜的主要原料。但因其机械性能较差，遇水结构易塌陷，降解过快、与骨组织生长速度不匹配。为克服胶原材料降解的缺陷，也有使用戊二醛等化学交联剂来延长其在体内的降解时间，但它们在产品中的残留会引起患者机体对产品的排斥，加上其制备方法复杂，因此规模化生产难度大。另外，异种胶原植入物最关键的问题的是材料的抗原性问题，动物抗原可能激发免疫反应。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，提供一种组织再生引导膜，能具有适当的降解速度、良好的生物相容性、亲水性和骨诱导能力。

本发明所进一步要解决的技术问题在于，提供一种组织再生引导膜制备方法，以便能便捷地制备出具有适当降解速度、良好的生物相容性、亲水性和骨诱导能力的组织再生引导膜。

为解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：一种组织再生引导膜制备方法，其包括如下步骤：

前处理步骤，收集哺乳动物的腹膜，流动水洗涤及脱毛后采用流动水洗的机械法进行初步脱脂，再储存在0-4℃环境中备用；

去抗原处理步骤，依次采用酶处理工艺、碱处理工艺、酸处理工艺和高渗处理工艺对初步脱脂后备用的腹膜进一步脱脂，去除免疫原性；

胶原纤维收缩处理步骤，对经去抗原处理后的腹膜依次进行脱水、去除非亲水性物质和水洗处理，使腹膜的胶原纤维收缩，提升膜组织的致密度；

干燥步骤，将收缩处理后的腹膜平铺于培养皿表面，使腹膜的致密层接触培养皿，迅速转移至-60到-80℃冰箱中预冻1-8小时，再放入冻干机中冻干24-36小时后得到具有致密层和疏松层的可引导组织再生的胶原膜。

进一步地，在前处理步骤中，收集是的刚刚被宰杀的猪、牛或羊的腹膜。

进一步地，去抗原处理步骤中采用的酶处理工艺的具体操作为：将备用的腹膜先在质量比浓度为0.1%-3.0%且温度控制在30-40℃的脂肪酶中浸泡5-10小时，去除组织中的脂肪，然后再放入质量比浓度为0.2%-3%且温度控制在30-40℃的胰蛋白酶或胃蛋白酶或中性蛋白酶中浸泡10-24小时。

进一步地，去抗原处理步骤中采用的碱处理工艺的具体操作为：在2-8℃的温度条件下用无机碱性试剂进行碱处理，溶解和去除腹膜上的体毛和大部分具有免疫原性的蛋白聚糖和酶处理后残余的微量脂肪，并软化胶原纤维结构防止胶原变性，所述无机碱性试剂为质量比浓度为0.3-10%的氢氧化钠或氢氧化钾溶液，pH为13-14。

进一步地，去抗原处理步骤中采用的酸处理工艺具体操作为：在2-8℃的温度条件下，采用酸性试剂处理，发生酸不稳定的交联水解，去除对酸敏感的污染物和非胶原物质，且促使组织吸水膨胀，胶原纤维结构松开，胶原纤维结构进一步打开，胶原束变得松散，然后将材料进行水洗直至pH达到2.0到3.5范围，获得具有一个光滑面以及一个松散的纤维质面的腹膜组织，所述酸性试剂为质量比浓度为1-8%且pH为0.5-1.5的无机酸或有机酸，所述无机酸为盐酸或硫酸，所述有机酸为乳酸、柠檬酸或乙酸。

进一步地，去抗原处理步骤中的高渗处理工艺具体操作为：将腹膜组织置入pH为3.0-3.5，质量体积比为5g/L-10g/L的NaCl溶液中，将温度控制为2-8℃，搅拌处理4-18小时后用NaHCO₃溶液中和并用水冲洗，得到去抗原的天然腹膜组织。

进一步地，胶原纤维收缩处理步骤的具体操作如下：

脱水处理，将去抗原的腹膜组织置入丙酮或酒精溶液中，在脱色摇床上以60-80r/min的速度进行摇晃5-30分钟后，夹在两个医用不锈钢板中间通过抽真空进行干燥；

去除非亲水性物质处理，使用烃溶剂、链烷醇溶剂或醚溶剂中的一种或几种的混合物对脱水处理后的腹膜进行非亲水性物质萃取，同时去除组织中残留的微量脂肪；