[发明专利]鉴别或辅助鉴别花脸蘑原生质体单核体交配型的方法及其专用引物对IS-818

说明书

技术领域

本发明涉及鉴别或辅助鉴别花脸蘑原生质体单核体交配型的方法及其专用引物对IS-818。

背景技术

营养不亲和系统是一种识别异己的遗传系统，在多数真菌中，该系统能引起遗传上明显不同的个体在交接区产生特征性的体细胞不亲和性（戚元成等，中国栽培糙皮侧耳品种体细胞不亲和性实验与RAPD分析结果的比较.菌物学报，2010,29（3））反应，体细胞不亲和性反应的强度因个体不同而异。在真菌中，营养不亲和又称为体细胞不亲和或异核体不亲和，它的作用在于防止同一种内交配型不同的个体或营养不亲和位点上基因不同的个体间的融合，以保持个体遗传上的稳定性。交配型是根据交配因子的个体间能否完成交配结合而确定的结合类型（中国标准出版社第一编辑室，中国农业标准汇编（食用菌卷）.中国标准出版社，2010）。在真菌的有性生殖和营养生长过程中都存在一个自己或异己识别的机制或系统。有性生殖阶段靠交配型因子识别；而营养生长阶段的识别是靠异核体不亲和系统来进行的。异核体不亲和性是普遍存在于真菌中的一种生物学现象，在子囊菌、担子菌、接合菌等真菌中是一种普遍存在的现象。在异核体形成过程中，非己识别系统通过一系列蛋白因子的相互作用最终导致遗传背景不同的核不能形成稳定的异核体,也就是所谓的异核不亲和性。异核体不亲和性是一个受基因调控的过程并且往往异核体不亲和性的菌丝体会死亡。

异核菌丝体在原生质体制备过程中出现单核原生质体的现象。这些单核原生质体经过再生培养和遗传筛选成为原生质体单核体，由于原生质体单核体是直接来源于营养菌丝，没有经历过减数分裂的无性后代，它为食用菌的遗传和育种研究提供了一种十分重要的基础材料。原生质体单核体的杂交育种方式是把两个分别来自双核亲本的原生质体单核体两两接入同一PDA平板，对峙培养进行杂交。在杂交过程中，两个原生质体单核体的细胞质进行重组，形成一个异质异核的杂交后代。这一方法的主要特点是，根据亲本性状不易在原生质体单核体中分散和稀释，在育种程序中可以从一个比较小的变异范围内去选择具有亲本性状的不育单核体，有效地克服了传统育种过程中由孢子单核体遗传多样性所造成的亲本性状分散和选材困难的障碍，减少了筛选杂交后代的工作量。同时，由于原生质体单核体是在实验室条件下获得的，无季节性限制，因此缩短了育种时间。

花脸蘑Lepista sordida（Fr）Sing属于担子菌亚门(Basidiomycomycotina)、层菌纲(Hymenomycetes)、伞菌目(Agaricales)、口蘑科(Tricholomataceae)、香蘑属(Lepista)。该菌营养丰富，具有一定的药用功效。在中国主要分布于贵州、黑龙江、辽宁、河北、河南、甘肃、青海、四川、新疆、山西、内蒙古和福建等地,是一种名贵的食用菌和药用菌，人工栽培花脸香蘑还处于小规模试验阶段，野生产量低且稀少，其价格极其昂贵，是一种很有开发潜力的野生菌种。但实际生产中存在产量低，抗虫能力差，适应温度范围窄，子实体易碎，不易运输、保存等亟待解决的难题。这就要求花脸蘑的遗传育种相关的基础研究加大力度，为传统的遗传育种奠定坚实的理论基础和技术支持。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种鉴别或辅助鉴别花脸蘑原生质体单核体交配型的方法及其专用引物对IS-818。

本发明所提供的鉴别或辅助鉴别花脸蘑原生质体单核体交配型的PCR引物对，名称为IS-818，由SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的两条单链DNA组成。

其中，SEQ ID No.1由22个脱氧核苷酸组成，SEQ ID No.2由21个脱氧核苷酸组成。

含有PCR引物对IS-818的鉴别或辅助鉴别花脸蘑原生质体单核体交配型的试剂或试剂盒也属于本发明的保护范围。

所述试剂或试剂盒除PCR引物对IS-818外，还含有进行PCR和DNA测序的其它常规试剂。

本发明的实验证明PCR引物对IS-818、含有PCR引物对IS-818的试剂或试剂盒可用于鉴别或辅助鉴别花脸蘑原生质体单核体交配型。

本发明所提供的鉴别或辅助鉴别花脸蘑原生质体单核体交配型的方法，包括如下步骤：分别以待鉴别的两株花脸蘑原生质体单核体的基因组DNA为模板，用由SEQ IDNo.1和SEQ ID No.2的两条单链DNA组成的PCR引物对IS-818进行PCR扩增，检测所得到的PCR产物的大小，根据PCR扩增产物的大小按照下述方法确定所述待鉴别的两株花脸蘑原生质体单核体的交配型：