[发明专利]一种有机磷农药降解酶活力检测方法

权利要求书

1.一种有机磷农药降解酶活力检测方法，包括如下步骤：

酶促反应在石英比色杯中进行，将待测酶液加入酶促反应体系，于291nm波长下测定酶促反应前后吸光度的变化，对照毒死蜱标准曲线，计算有机磷农药降解酶活力。

2.按权利要求1所述的有机磷农药降解酶活力检测方法，其特征在于：向酶促反应体系中加入的待测酶液体积为10μl~200μl，加入待测酶液后酶促反应体系总体积为2ml~3ml。

3.按权利要求1所述的有机磷农药降解酶活力检测方法，其特征在于：酶促反应体系中含有Tris-HCl缓冲液、吐温80及毒死蜱，加入待测酶液后各组分终浓度为：Tris-HCl10μM~50μMpH7.0~9.0、吐温800.05%~0.5%（体积百分比）、毒死蜱10μM~100μM，余量为去离子水。

4.按权利要求1、2或3所述的有机磷农药降解酶活力检测方法，其特征在于：酶促反应在25℃~35℃条件下进行，反应时间为1min~3min。

5.按权利要求1所述的有机磷农药降解酶活力检测方法，其特征在于：

标准曲线绘制过程：

（1）毒死蜱标准溶液的制备：以含有0.05%~0.5%（体积百分比）吐温80的浓度为10μM~50μM的Tris-HCl（pH8.0）缓冲液为溶剂，分别制备毒死蜱浓度为10μM、20μM、30μM、40μM、50μM、60μM的毒死蜱标准溶液；

（2）毒死蜱标准曲线的绘制：将上述不同浓度的毒死蜱标准溶液于291nm波长下测定吸光度，横坐标为毒死蜱溶液浓度，纵坐标为吸光度，绘制毒死蜱标准曲线（图1）。

6.按权利要求1所述的有机磷农药降解酶活力检测方法，其特征在于：

有机磷农药降解酶酶活力（U）定义为：在30°C，pH8.0的条件下，1min降解1μmol毒死蜱所需要的酶量。

酶活力计算公式：

X=(A₁-A₂)×V₁/(k×V₂×t)

式中：X——酶活力（U/ml）

A₁——反应前吸光度

A₂——反应后吸光度

V₁——加入待测酶液后酶促反应体系体积（L）

k——毒死蜱标准曲线斜率

V₂——酶液体积（ml）

t——反应时间（min）。