[发明专利]一种冬虫夏草发酵菌丝体活性组分的发酵及提取方法

权利要求书

1.一种冬虫夏草发酵菌丝体活性组分的发酵及提取方法，所述方法包括：

（1）种子液制备：液体种子培养基经灭菌后接入中国被毛孢菌株，50~300rpm、10~30℃下振荡培养2~35天，得到种子液；所述液体种子培养基组成如下：碳源0.5～4%，氮源0.1～2%，KH₂PO₄0.01~0.5%，MgSO₄0.01~0.5％，溶剂为水，pH6.0~7.0；所述碳源为下列之一或其中两种以上的混合物：葡萄糖、蔗糖、玉米粉；所述氮源为下列之一或其中两种以上的混合物：蛋白胨、酵母粉、蚕蛹粉、麦麸、豆饼粉；

（2）发酵培养：液体发酵培养基以2～25%体积比接种量接入种子液，在气升式发酵罐中进行发酵，罐压0.02~0.07Mpa，发酵罐通气量为1:0.2V/V.min~1:3V/V.min，培养温度15～25℃，培养时间3~30天；所述液体发酵培养基组成同液体种子培养基；

（3）菌丝体超微粉碎处理：发酵液离心后，所得菌丝体进行真空冷冻干燥，再放入超微粉碎机中于5~30℃下进行低温粉碎2~20min，得到菌丝体超微粉；

（4）发酵菌丝体仿生提取：菌丝体超微粉加入至10~50倍质量的水中，加入足量酶1，调pH值为1.0~3.0，35~37℃、40~300rpmrpm下搅拌提取20min~150min，离心，得上清液1，取沉淀加入至10~50倍质量的水，加入足量酶2，调pH值为8.0~10.0，35~37℃、50~250rpmrpm下搅拌提取10min~120min，离心，得上清液2；合并上清液1和上清液2，调pH值为中性，即得冬虫夏草发酵菌丝体活性组分；

所述酶1为下酶中的一种或多种：①胃蛋白酶、②木瓜蛋白酶、③α-淀粉酶、④凝乳酶；

所述酶2为下列中的一种或多种：①肠肽酶、②胰蛋白酶、③凝乳酶、④碱性蛋白酶。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述酶1为胃蛋白酶，或者为胃蛋白酶与木瓜蛋白酶、α-淀粉酶或凝乳酶的混合物，胃蛋白酶用量为2000~10000U/g菌丝体超微粉，木瓜蛋白酶用量为1000~5000U/g菌丝体超微粉，α-淀粉酶用量为1000~3000U/g菌丝体超微粉，凝乳酶用量为50~200U/g菌丝体超微粉。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述酶2为肠肽酶与胰蛋白酶、凝乳酶、碱性蛋白酶中一种或多种的混合物；肠肽酶用量为1~20U/g菌丝体超微粉，胰蛋白酶用量为100~500U/g菌丝体超微粉，凝乳酶用量为200~500U/g菌丝体超微粉，碱性蛋白酶用量为300~800U/g菌丝体超微粉。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述酶1为胃蛋白酶与凝乳酶的混合物，胃蛋白酶用量为5000~6000U/g菌丝体超微粉，凝乳酶用量为80~100U/g菌丝体超微粉；所述酶2为肠肽酶与胰蛋白酶的混合物，肠肽酶用量为5~10U/g菌丝体超微粉，胰蛋白酶用量为300~500U/g菌丝体超微粉。