[发明专利]线粒体全基因组DNA扩增、引物、测序及突变检测

权利要求书

1.用于扩增线粒体全基因组序列的引物对组，其特征在于：所述引物对组包括以下A-H中的至少一对引物，优选含有A-H中的所有八对引物， 

a、seq ID No.1:5’-CACTCCCATACTACTAATCTC-3’, 

seq ID No.2:5’-TAGCATGTACTGCTCGGAGGT-3’, 

b、seq ID No.3:5’-GTCCTAAACTACCAAACCTGC-3’, 

seq ID No.4:5’-GTGTTAGTCATGTTAGCTTG-3’, 

c、seq ID No.5:5’-ATCTCTCCCTCACTAAACGTAAG-3’, 

seq ID No.6:5’-ATGAGGGCGTGATCATGAAAGGT-3’, 

d、seq ID No.7:5’-GCATACACCACATGAAACATC-3’, 

seq ID No.8:5’-ATGCCGTCGGAAATGGTGAAG-3’, 

e、seq ID No.9:5’-TCCCACTCCTAAACACATCC-3’, 

seq ID No.10:5’-AAACCCGGTAATGATGTCGG-3’, 

f、seq ID No.11:5’-GCCCACGGGCTTACATC-3’, 

seq ID No.12:5’-GATTGTTAGCGGTGTGGTCG-3’, 

g、seq ID No.13:5’-GCCTTCTTACGAGCCAAAACC-3’, 

seq ID No.14:5’-TCCAGCGTCTCGCAATGCTAT-3’, 

h、seq ID No.15:5’-TTCGCCTACACAATTCTCCG-3’, 

seq ID No.16:5’-TTTATGGGGTGATGTGAGCC-3’。 

2.一种线粒体全基因组DNA扩增方法，所述方法包括，采用权利要求1所述的引物对组，以线粒体DNA为模板，进行PCR扩增。 

3.根据权利要求2所述的线粒体全基因组DNA扩增方法，其特征在于：所述PCR扩增时，各引物对的退火温度为52-56℃，优选为56℃。 

4.一种线粒体全基因组测序方法，所述方法包括，采用权利要求2或3所述的方法扩增得到线粒体全基因组DNA，构建测序文库，采用高通量测序平台进行全基因组测序。 

5.根据权利要求4所述的线粒体全基因组测序方法，其特征在于：所述高通量测序平台为Miseq测序仪。 

6.根据权利要求5所述的线粒体全基因组测序方法，其特征在于：所述测序方法包括，将PCR扩增得到的产物分别纯化并混合后，制备DNAPaired-End PCR Free文库，制备好的文库质检合格后在Miseq测序仪上直接测序检测。 

7.根据权利要求6所述的测序方法，其特征在于：所述制备DNAPaired-End PCR Free文库具体包括， 

i、将所述PCR产物打断，使打断后DNA主带集中在目的片段大小范围； 

ii、将步骤i的产物进行末端修复； 

iii、将步骤ii的产物进行3’端加A碱基； 

iv、将步骤iii的产物片段加上测序接头； 

v、选择并回收目的DNA片段，获得所述DNA文库； 

任选地，所述目的片段为100～1000bp，优选为400～600bp，更优为500bp。 

8.一种线粒体DNA的突变检测方法，所述方法包括，采用权利要求4-6任意一项所述的方法进行线粒体全基因组测序，获得线粒体全基因组DNA序列，将测序结果与线粒体参考序列比对。 

9.根据权利要求8所述的突变检测方法，其特征在于：所述线粒体参考序列为修正后的剑桥参考序列NC_012920.1。 

10.一种试剂盒，所述试剂盒含有权利要求1所述的引物对组。 

11.根据权利要求10所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒用于线粒体全基因组DNA扩增。