[发明专利]与PD-1和VEGF高效结合的融合蛋白、其编码序列及用途

说明书

本发明属于生物医药领域，涉及一种与PD‑1和VEGF高效结合的融合蛋白、其编码序列及用途。具体地，本发明涉及一种分离的融合蛋白，其包含如下肽段：（1）人类PD‑L2的胞外区肽段；（2）人类FLT‑1胞外区第2个免疫球蛋白样结构域的肽段或/和KDR胞外区第3个免疫球蛋白样结构域的肽段；以及任选的（3）人类免疫球蛋白的Fc段。本发明的融合蛋白能够抑制肿瘤细胞生长，促进其死亡，抑制T细胞失活，增强杀瘤能力。

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种与PD-1和VEGF高效结合的融合蛋白、其编码序列及用途。

背景技术

单克隆抗体靶标明确，临床应用安全性好、疗效明显，目前共有10个肿瘤单克隆抗体经美国FDA批准上市销售，已成为多种类型恶性肿瘤治疗的一线药物。然而一方面，全长抗体分子量大，不易进入实体瘤组织，难以在肿瘤内部达到有效治疗浓度，从而发挥抗肿瘤疗效。另一方面，肿瘤发病机制复杂，细胞内信号通路冗余或交叉，单一靶标的治疗疗效不足且易形成耐药性。而应用多个针对不同靶标的单抗进行联合治疗，疗效虽优于单一靶标治疗，但费用非常昂贵，患者难以承担。因而，非常必要研制分子量小、多靶点的抗体类蛋白药物。

程序性死亡分子1（programmed death-1 receptor，PD-1）是T细胞天然免疫抑制分子，肿瘤细胞可通过过量表达其细胞表面PD-1的配体（PD-L1/PD-L2），作用于T细胞表面PD-1，激活PD-1通路，诱导T细胞凋亡，形成免疫逃逸及耐受。因而，PD-1已成为肿瘤治疗的重要靶标。一项PD-1抗体（BMS-936558或MDX-1106）的I期临床试验（296例患者）表明，PD-1抗体能使四分之一至五分之一的非小细胞肺癌患者，黑色素瘤患者，或肾细胞癌患者产生客观反应（J Clin Oncol.2010;28:3167-75；N Engl J Med.2012;366:2443-54），显示其具有良好的临床应用价值。

VEGF有促进血管生成的作用，肿瘤细胞可大量分泌VEGF，作用于其受体VEGFR1（Vascular endothelial growth factor receptor 1,也称作FLT-1）及VEGFR2（Vascularendothelial growth factor receptor 2,也称作KDR），诱导肿瘤组织新生血管的生成，使肿瘤体积快速扩张（Nat Med.1999;5:1359-64）；此外，VEGF可以抑制DC的分化与成熟，抑制机体的抗肿瘤T细胞免疫应答而逃避免疫监视（Blood.2003;101:4878-86）。目前，针对VEGF的单抗Bevacizumab（Avastin）已经由美国FDA批准上市销售，广泛应用于结肠癌、乳腺癌、非小细胞性肺癌、肾癌、神经胶质瘤的治疗，2010年销售额达64.6亿美元。

有意思的是，Flt-1或KDR的胞外区多肽也可在体外阻断VEGF信号通路，抑制血管内皮细胞的生长（Cancer Res.2002;9:633-40）。通过基因工程技术，将Flt-1与KDR胞外区段中的某些特定免疫球蛋白样（Ig样）结构域（如Flt-1的第2Ig样结构域Flt1-D2，KDR的第3Ig样结构域KDR-D3）融合，可有效阻断细胞VEGF信号通路（Proc Natl Acad SciUSA.2002;99:11393-8；Gene Ther.2009;16:10-6）。

因而，如能同时阻断肿瘤细胞VEGF及T细胞PD-1通路，有望有效抑制肿瘤生长，消除免疫耐受，发挥抗肿瘤作用。

发明内容

本发明人经过深入的研究和创造性的劳动，得到了一种融合蛋白，本发明人惊奇地发现，其能够与PD-1、VEGF高效结合，同时阻断肿瘤细胞VEGF及T细胞PD-1通路，具有显著的抗肿瘤作用，有应用于制备防治恶性肿瘤的药物或基因治疗药物的潜力。由此提供了下述发明：

本发明的一个方面涉及一种分离的融合蛋白，其包含如下肽段：

1）人类PD-L2的胞外区肽段；