[发明专利]一种高山羊齿的繁育方法

权利要求书

1.一种高山羊齿繁育的专用培养基，其特征在于，由以下两个培养基组成：

（1）诱导增殖培养基：

MS基本培养液

（2）生根培养基：

1/2MS基本培养液

2.根据权利要求1所述的高山羊齿繁育的专用培养基，其特征在于，由以下两个培养基组成：

（1）诱导增殖培养基：

MS基本培养液

（2）生根培养基：

1/2MS基本培养液

3.一种高山羊齿的繁育方法，包括以下步骤：

(1)取成熟期的高山羊齿孢子用纱布包好后，在超净环境下用质量分数为75%的酒精浸泡30-40s后，依次放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中消毒6min，次氯酸钠混合液中消毒10min，再用无菌水冲洗4～5次，每次2min，即获得高山羊齿无菌孢子，所述的次氯酸钠混合液是由次氯酸钠溶液加入吐温20混合而成，次氯酸钠溶液与吐温20的配比是：质量分数为2%的次氯酸钠溶液100ml中加入2滴吐温20；

(2)诱导和增殖培养：将步骤(1)获得的高山羊齿无菌孢子接入盛有下列诱导增殖培养基的培养瓶中：

MS基本培养液

在温度为25℃±2℃条件下暗培养15d～16d，转到光照强度为1500lx～2000lx，温度为25℃±2℃，光照时间为8～10h/d的条件下，继续培养至高山羊齿孢子萌发分化出绿色球状体，将绿色球状体切开；

(3)继代培养：将步骤(2)切开的绿色球状体转接到盛有与步骤(2)所述的诱导增殖培养基配方相同的新的诱导增殖培养基的培养瓶中，在光照强度为1500lx～2000lx，温度为25℃±2℃，光照时间为8～10h/d的条件下，继代培养25～30d后，再转接到盛有与步骤(2)所述的诱导增殖培养基配方相同的新的诱导增殖培养基的培养瓶中，并在与继代培养所述的相同的培养条件下继代培养25～30d，如此反复，待增殖基数达到所需的数量时，将培养出的苗转入步骤（4）培养；未成苗的绿色球状体转接到盛有与步骤(2)所述的诱导增殖培养基配方相同的新的诱导增殖培养基的培养瓶中，并在与继代培养所述的相同的培养条件下继续培养，待成苗后，将培养出的苗转入步骤（4）培养；

（4）生根培养基：将步骤（3）获得的苗接种到盛有下列生根培养基的培养瓶中：

1/2MS基本培养液

在光照强度为1500lx～2000lx，温度为25℃±2℃，光照时间为10～12h/d的条件下培养至植株基部长出根；

（5）将步骤（4）植株已长有根的培养瓶置于大棚内进行常规炼苗3～5d，再将培养瓶内的苗取出，按常规洗净苗上的培养基，放入质量分数为0.1～0.2%的多菌灵溶液中消毒1～2min后，移栽至装有下列基质的育苗袋中，所述基质由泥炭、腐质土、珍珠岩和蛭石混合而成，泥炭、腐质土、珍珠岩和蛭石的质量比为：泥炭：腐质土：珍珠岩：蛭石=7:3:1:0.5，在常规浇水和施肥管理条件下，生长40d后，即得高山羊齿移栽苗。

4.根据权利要求3所述的高山羊齿的繁育方法，其特征在于：

步骤（2）诱导和增殖培养是将步骤(1)获得的高山羊齿无菌孢子接入盛有下列诱导增殖培养基的培养瓶中：

MS基本培养液

在温度为25℃条件下暗培养16d，转到光照强度为1800lx，温度为25℃，光照时间为9h/d的条件下，继续培养至高山羊齿孢子萌发分化出绿色球状体，将绿色球状体切开；

步骤(3)继代培养的条件是光照强度为1800lx，温度为25℃，光照时间为9h/d,继代培养27d；

步骤（4）生根培养基是将步骤（3）获得的苗接种到盛有下列生根培养基的培养瓶中：

1/2MS基本培养液

在光照强度为1800lx，温度为25℃，光照时间为11h/d的条件下培养至植株基部长出根。