[发明专利]同时鉴别Q型和B型烟粉虱的特异性PCR方法及试剂盒

权利要求书

1.用于检测B型烟粉虱和Q型烟粉虱的方法，包括对待测烟粉虱的DNA进行PCR扩增和检测PCR扩增产物，其特征在于： 

所述PCR扩增所采用的引物对如下： 

上游引物Bt-F：5’-TCT CAT CGG TGT CTT ATT G-3’， 

下游引物Bt-R：5’-CTT CGG GTC GTT TCT CGT-3’； 

所述检测PCR扩增产物指对PCR扩增产物进行凝胶电泳并观察是否出现特征带型，Q型烟粉虱的特征带型为一条507bp条带；B型烟粉虱特征带型为507bp和660bp两条带。 

2.根据权利要求1所述的方法，所述PCR扩增的体系：Taq DNA聚合酶0.05U/μl、1×Taq缓冲液、氯化镁1.5mM、dNTPs 200μM、上游引物和下游引物的浓度分别为0.5μM、DNA模板浓度为0.17×10^-5~0.2ng/ul，加ddH₂O至20μl。 

3.根据权利要求1或2所述的方法，所述PCR扩增的程序为：94℃预变性3分钟；然后进行30个循环：94℃变性1分钟、59℃退火45秒、72℃延伸110秒；最后72℃延伸10min。 

4.用于检测B型烟粉虱和Q型烟粉虱的试剂盒，其特征在于包括一对PCR引物： 

上游引物Bt-F：5’-TCT CAT CGG TGT CTT ATT G-3’， 

下游引物Bt-R：5’-CTT CGG GTC GTT TCT CGT-3’。 

5.根据权利要求4所述的试剂盒，还包括用于PCR检测的试剂：Taq DNA聚合酶，dNTPs，氯化镁，Taq DNA聚合酶缓冲液和无菌水。 

6.根据权利要求4所述的试剂盒，所述PCR引物预混于PCR预混体系中，所述PCR预混体系如下：Taq DNA聚合酶0.05U/μl、1×Taq缓冲液、1.5mM氯化镁、200μM dNTPs、上游引物和下游引物分别0.5μM和无菌水。