[发明专利]同时鉴别Q型和B型烟粉虱的特异性PCR方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物检测技术，特别是一种同时鉴别Q型和B型烟粉虱的特异性PCR方法及试剂盒。

背景技术

烟粉虱Bemisia taabaci属半翅目，粉虱科，广泛分布于世界各大洲，通过直接取食植物汁液、分泌蜜露污染植物以及传播植物病毒对农业和园艺生产造成严重危害。烟粉虱入侵性极强，过去二十多年来，烟粉虱入侵到全球多个国家和地区并取代了当地多个土著烟粉虱，对世界各地多种重要作物造成了严重危害，除了本身刺吸植物汁液引起叶片甚至植株萎蔫、寄主植物生理紊乱外，最重要的是烟粉虱传播的双生病毒病－番茄黄曲叶病毒病大面积暴发为害（Brown&Czosnek,2002；Czosnek&Ghanim,2011），并由南方蔓延到北方（张穗等，2006；吴永汉等，2007；周莹等，2010）。病毒病的流行给番茄生产带来了巨大威胁，局部地区的番茄大棚甚至绝收。因而，烟粉虱成为全球密切关注的“超级害虫”(Liu et al.，2007;Martinez-Carrillo and Brown,2007;Bethke et al.，2009)。烟粉虱是一个包括许多遗传型的复合种，被命名的生物型至少有24个（Dinsdale et al.，2010），截止到2011年，已经报道的亚种至少有32个，目前我国至少存在6种生物型(B，Q，ZHJ-1，ZHJ-2，ZHJ-3，FJ-l)(万方浩等，2009)，这其中分布最为广泛、危害最为严重的生物型为近年来入侵我国并逐步形成蔓延扩散趋势的B型和Q型烟粉虱。根据最近发表的系统发育分析文献，杂交试验和交配行为观察结果表明烟粉虱至少包括28个遗传结构差别明显、但外部形态无法区分的隐种（Dinsdale et al.,2010;Xu et al.,2010;De Barro et al.,2011;Hu et al.,2011）。然而，形态学上尚缺乏的有力证据以及遗传学角度的分类方法是否合理，使得隐种的命名法则在分类学上无充足的依据，所以本申请中依然沿用生物型的概念。在所有烟粉虱的生物型中，B型和Q型烟粉虱当属入侵性强、在全世界范围内广泛分布、危害性最严重。

B型烟粉虱起源于中东-小亚细亚地区（De Barro et al.,2011），90年代中后期，B型烟粉虱入侵中国，并给农业和园艺生产带来了经济损失。2005年在中国云南首次发现了Q型烟粉虱（禇栋等，2005），在随后的几年内，发现Q型烟粉虱逐渐取代了B型烟粉虱，2009年底我国已经至少有21个省市发现了Q型烟粉取代了原来为害的B型烟粉虱（Pan et al.,2011）;但在一些地区，田间发现二者是混合发生的（褚栋等，2007；褚栋等，2009）。

B型烟粉虱和Q型烟粉虱表观一致，在形态上无法区分，但二者在生物学特性、寄主植物、生理和分子水平上存在明显差异，例如Q型烟粉虱比B型烟粉虱具有更强的寄主适应性和抗药性（Muniz,2000;Horowitz et al.,2003），对病毒病的传播能力更强（pan et al.,2012）等，而且许多遗传型之间存在生殖隔离。目前经常用于区分其生物型的分子鉴定方法就是采用mtCOI特异性引物进行特异性PCR扩增，然后将PCR扩增产物进行测序和序列比对，进而来确定是何种生物型（罗晨等，2002）。但是这种方法需要经过PCR扩增、克隆、测序、序列比对等诸多步骤，耗时较长，而且需要大量的资金作为支持。