[发明专利]一种甘油二酯激酶α基因-壳聚糖纳米粒在制备治疗过敏性哮喘药物中应用

权利要求书

1.一种甘油二酯激酶α基因-壳聚糖纳米粒在制备治疗过敏性哮喘药物中应用，其特征在于，所述甘油二酯激酶α基因-壳聚糖纳米粒作为唯一有效成分在制备治疗过敏性哮喘药物中的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述甘油二酯激酶α基因-壳聚糖纳米粒在制备减轻哮喘气道炎症药物中的应用。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述甘油二酯激酶α基因-壳聚糖纳米粒在制备降低哮喘血清中过敏原特异性IgE和支气管肺泡灌洗液中白细胞介素-4和白细胞介素-5药物中的应用。

4.一种甘油二酯激酶α基因-壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征在于，包括：

步骤1、制备甘油二酯激酶α质粒：全基因合成小鼠白细胞介素-2信号肽序列和小鼠甘油二酯激酶α基因的融合基因，克隆到pEGFP-N3载体而制备得甘油二酯激酶α质粒；

步骤2、将壳聚糖溶解于1％醋酸水溶液，配制成浓度为0.5～2.5mg/ml的壳聚糖醋酸溶液，用NaOH将其pH值调节在5.5～5.7之间，无菌膜过滤，其中所述壳聚糖的分子量在2～60万道尔顿之间，其脱乙酰度在90％～95％之间，所述无菌膜的孔径为0.22μm；

步骤3、将所述甘油二酯激酶α质粒溶解在浓度为10～25mM的经孔径为0.22μm的无菌膜过滤的无水硫酸钠溶液中，制备得浓度在100～360μg/ml之间的甘油二酯激酶α质粒溶液。其中，步骤2中所述壳聚糖醋酸溶液中的氨基摩尔数与所述甘油二酯激酶α溶液中的磷酸酯基摩尔数之比≥5；

步骤4、所述的甘油二酯激酶α质粒溶液和所述壳聚糖醋酸溶液在温度在55℃～57℃之间的水浴中加热10～15min；

步骤5、在漩涡震荡的条件下，按体积比1∶1的比例，将经水浴加热后的所述甘油二酯激酶α溶液缓慢匀速加入到经水浴加热后的所述壳聚糖醋酸溶液中，旋涡振荡30～60s，室温静置，既得甘油二酯激酶α基因-壳聚糖纳米粒溶液。

5.如权利要求4所述的甘油二酯激酶α基因-壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征在于，所述步骤5中的甘油二酯激酶α基因-壳聚糖纳米粒溶液的保存温度为4℃。

6.如权利要求4所述的甘油二酯激酶α基因-壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征在于，本方法制备得的甘油二酯激酶α基因-壳聚糖纳米粒溶液中的甘油二酯激酶α基因-壳聚糖纳米粒的粒径在150nm～500nm之间，其中粒径在150nm～300nm之间的甘油二酯激酶α基因-壳聚糖纳米粒占60％以上。