[发明专利]一种群勃龙残留快速检测试纸卡及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于免疫化学检测技术领域，具体涉及一种群勃龙残留快速检测试纸卡及其制备方法。

背景技术

群勃龙（Trenbolone，TRE），俗称追宝龙，化学名称为去甲雄三烯醇酮（17-β-hydroxyestra-4,9,11-trien-3-one-17-acetate），是一种人工合成的促蛋白同化激素。群勃龙在临床上可用于治疗严重的营养缺乏、骨质疏松症及重度烧伤等疾病，由于具有合成代谢和雄激素的功效，用其喂养畜禽时可使营养成分由脂肪组织向肌肉组织转移，从而促进肌肉生长和提高食欲。它还可以增加蛋白质合成，促进肌肉发达和红细胞生成，增强体力和耐力，因此在运动会和动物竞技比赛中被用作兴奋剂，这严重违背了体育竞赛的公平精神。

群勃龙残留的危害包括对动物本身产生的危害和由于群勃龙在动物源食品中的残留对人体产生的危害，其副作用包括皮肤痤疮、性功能减退以及睾丸萎缩，女性使用者则是体毛增长、胸部变小及经期不规律等。长期食用时会严重干扰人体的自然激素平衡，导致内分泌失调、生育能力下降，并具有潜在的致癌性和发育毒性。

由于这些有害的毒副作用，TRE的使用在许多国家得到了严格的监管。国际食品法典委员会(CAC)、美国、日本等组织和国家对动物食品中蛋白同化类激素的残留都有严格的要求。FAO / WHO食品添加剂联合专家委员会（JECFA）在文件“TRS788-JECFA34/40”中规定：TRE在动物肌肉和肝脏中的最大残留限量（MRLs）分别为2 ng/g和10 ng/g。2004年欧盟对我国畜禽产品提出了18个种类的兽药残留、抗生素检测监控要求，其中明确指出，动物源性食品药物残留中，群勃龙不得检出。我国农业部2002年4月发布的第193号公告《食品动物禁用的兽药及其它化合物清单》也明确表示，性激素类原料药及其单方、复方制剂产品不准以抗应激、提高饲料报酬、促进动物生长为目的在所有食源动物的饲养过程中使用。因此，迫切需要建立方便、快捷、灵敏的检测方法，来监控TRE在动物饲料和组织的残留。

TRE残留常用的检测方法有高效液相色谱法（HPLC），气相色谱－质谱法（GC-MS）和液相色谱－质谱法（LC-MS）等。这些方法灵敏度高，定性准确，可以确定化合物的分子量、分子式，甚至官能团，适合定量检测TRE含量。但这些方法成本高，需要专业的技术人员，昂贵的实验仪器及长时间的前期准备工作。而免疫学检测方法建立在抗体对抗原的分子识别上，其主要优点是抗原抗体的亲合力高、检测快速、经济实用，能够实现对生物液体的小体积、大通量检测，是最灵敏的方法之一。

胶体金标记免疫分析法是近年来迅速发展的一种新型分析技术，其特点是简便快速、成本低、无污染、无需培训，非常适合于现场检测。与ELISA相比，具有样品前处理简单，显色时间短（3-5 min），且所有试剂包含在一根试纸条上，无需使用仪器等优点，具有广阔的市场前景和应用价值。因此，研制快速、灵敏、高效的群勃龙残留快速检测试纸卡对于保障动物性食品安全具有十分重要的意义。本项目也得到2012年度国家自然科学基金项目 （U1204310）资金支持。

发明内容

本发明解决的技术问题是提供了一种操作简便、快速准确、灵敏度高、特异性强、成本低廉、稳定性好且可进行批量检测的群勃龙残留快速检测试纸卡。

本发明解决的另一个技术问题是提供了一种群勃龙残留快速检测试纸卡的制备方法。

本发明的技术方案是：一种群勃龙残留快速检测试纸卡，其特征在于：所述的群勃龙残留快速检测试纸卡包括塑料盒体和封装于塑料盒体内的试纸条，所述试纸条的底层为支撑层，该支撑层上由左到右依次附着有紧密相连的样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫，所述的塑料盒体上开有加样孔和观察窗，该加样孔的位置与试纸条上的样品垫位置相对应，观察窗与试纸条上的硝酸纤维素膜位置相对应，所述的硝酸纤维素膜上有群勃龙－鸡卵清白蛋白偶联物溶液印制的检测线和羊抗鼠IgG溶液印制的质控线，所述的金标抗体结合垫上灌注有胶体金标记的抗群勃龙特异性单克隆抗体。

本发明所述的支撑层为PVC板。本发明所述的吸收垫是以植物长纤维为原材料制成的纯白滤纸。本发明所述的样品垫和金标抗体结合垫是由玻璃纤维棉制作而成的。本发明所述的样品垫和金标抗体结合垫的叠压宽度为2 mm，吸收垫与硝酸纤维素膜的叠压宽度为2 mm。本发明所述的样品垫、金标抗体结合垫和吸收垫上方覆盖有胶膜保护层。本发明所述的硝酸纤维素膜两端分界处有标记线。