[发明专利]一种适宜南高丛蓝莓高效快繁技术

权利要求书

1.一种适宜南高丛蓝莓高效快繁技术，其特征在于，

a、选材：植物材料为智博生物科技公司种植园种植的南高丛蓝莓品种奥尼尔，外植体材料选用当年生幼嫩枝；

b、初代培养获得无菌苗：以田间生长的当年生嫩枝为初始外植体，摘除叶片。用洗衣粉水溶液洗净灰尘等污物后，自来水冲洗。转到超净工作台上，先后用75％酒精和0.1％升汞对外植体分别进行50s与10min的表面灭菌，接着用无菌水冲洗4次，2分钟/次，最后用无菌滤纸吸去外植体表面水分，将灭菌后的嫩枝切段形成1-2cm长的单芽茎段，然后放置在初代培养基中培养，诱导侧芽萌发；

c、继代培养的优化：待单芽茎段的茎段腋芽伸长后，将茎段腋芽切下转接于含有不同浓度激素组合的改良WPM培养基+20g/L蔗糖+8.8g/L日产琼脂粉的增殖培养基(pH＝5.2)中进行光照培养，光照培养条件为：温度25+2℃，光强2500Lx，光周期16h光照/8h黑暗；改良WPM培养基的改良方法是：以Ca(NO₃)₂·4H₂O、KNO₃代替原WPM培养基中的CaCl₂、K₂SO₄；

d、叶片再生体系的建立：将继代培养2个月的无菌苗植株叶片切下，按垂直叶片主脉离叶尖端的1/3处切下叶片分成叶尖端和叶柄端，将叶尖端、叶柄端和全叶这三部分均背面朝下分开放置接种于不同盐浓度和不同ZT浓度的改良WPS培养基+20g/L蔗糖+9g/L琼脂粉(pH＝5.2)的培养瓶内，每瓶各10片左右，每个处理组重复12瓶。先进行20d的暗培养，暗培养的温度为25±2℃，随后进行光照培养，光照培养条件为：温度25±2℃，光强2500Lx，光周期16h光照/8h黑暗，30d后统计叶片出芽率及每个叶片相应形成的苗数，从而获得最佳的叶片再生体系；

e、试管苗生根培养：将继代培养的无菌苗植株距顶端2.5～3.0cm左右切下，随机接种于含有不同盐浓度、不同IBA浓度和不同活性碳浓度组合的改良WPS培养基+20g/L蔗糖+9g/L琼脂粉(pH＝5.2)的培养瓶中进行光照培养，光照培养条件为：温度25±2℃，光强2500Lx，光周期16h光照/8h黑暗，记录起始生根时间，60d后统计生根率和生根数并观察苗的生长状况，从而筛选出最适宜的生根培养基；

f、炼苗：提前3d将瓶内生根试管苗打开瓶盖进行过渡，洗净根部培养基，随机移栽于不同炼苗基质，在保持湿度100％的育苗大棚中培养20d，然后在湿度80％、透光度70％的室外条件下过渡3d，再逐步通风换气，7d后完全揭去棚膜，2周后统计成活率，每种基质的栽植量不少于50株，各试验的重复次数不少于3次，统计成活率，以完成炼苗。

2.根据权利要求1所述的适宜南高丛蓝莓高效快繁技术，其特征在于，步骤b中初代培养基为改良WPM培养基+20g/L蔗糖+8.8g/L日产琼脂粉+1.0mg/L ZT，其pH＝5.2。

3.根据权利要求1所述的适宜南高丛蓝莓高效快繁技术，其特征在于，步骤c中，待单芽茎段的茎段腋芽伸长后，将茎段腋芽切下转接于含有不同浓度ZT、6-BA或TDZ的改良WPM培养基+20g/L蔗糖+8.8g/L日产琼脂粉的增殖培养基(pH＝5.2)中进行光照培养。

4.根据权利要求3所述的适宜南高丛蓝莓高效快繁技术，其特征在于，步骤c中，不定芽的发生率与培养基中的ZT浓度有密切的关系；当ZT质量浓度为0.5mg/L时，培养10d左右在茎基部产生黄绿色的愈伤组织，节处出现丛生芽，28d后增殖率达到5.02倍，且主要为主枝芽，丛生芽粗壮，生长势头好，呈鲜嫩状；当ZT质量浓度升高到1mg/L时，开始生长和分化的时间与0.5mg/L时相差不大，其增殖率稍有所增加；当ZT质量浓度等于和高于2mg/L时，再生苗开始生长和分化现象提前，多数分化出来的新梢枝上出现2次枝，增殖率达到10倍左右，由于侧枝芽多使苗长势较弱易出现玻璃化苗现象；使用6-BA时，外植体不萌芽生长，生长停滞。使用TDZ时，10d后在外植体基部形成少量愈伤，虽然能萌芽，但萌芽率低且生长缓慢；从增殖率、丛生芽长势、玉米素成本等方面进行综合考虑，继代培养基以WPM+0.5mg/L ZT为最佳。