[发明专利]一种适宜南高丛蓝莓高效快繁技术

说明书

技术领域

本发明涉及一种蓝莓高效快繁技术，具体涉及一种适宜南高丛蓝莓高效快繁技术。 

背景技术

蓝莓属杜鹃花科(Ericaeae)越桔亚科(Vaccinioideae)越橘属(Vaccinium)。蓝莓果实富含花青素、不饱和脂肪酸、鞣酸及钙、钾、锌、铁等元素，B族维生素含量尤为突出，被国际粮农组织列为五大健康食品之一，堪称世界水果之王，是近几年来发展最迅速的集营养与保健于一身的第3代果树品种^[1-4]。近几年，蓝莓鲜果和加工品风靡欧美等发达国家市场，虽然价格昂贵但仍供不应求，其传统的北美产区的产量己远不能满足本地和世界市场的需求，为此世界上其他国家己先后引种。我国有着可以生产蓝莓的广阔天地，南方红黄壤土地面积达2179600km²，占全国土地面积的22％，其中2040000km²土壤属酸性，而且很大一部分pH＜5.0^[5]。由于土壤酸度大和肥力不足，农业生产水平较低，人民生活水平低下。蓝莓特别适合酸性和强酸性土壤，正是红黄壤地区脱贫致富的理想作物。 

奥尼尔(O′Neal)为南高丛蓝莓的代表品种之一，果实大粒、蒂痕小、果粉较少、果肉质硬耐储运、丰产、香味浓，在南高丛蓝莓品种中香味评价较高，适宜在长江流域大部分地区种植。随着引种规模日益扩大，优良种苗需求量急剧增加，种苗生产供不应求。组织培养凭借其无性繁殖的独特优势，可以迅速去除病毒和更新品种，保留品种的本来特性，变异性小，并且可在较小空间内和较短时间内快速地获得大量无性系组培苗，成为蓝莓脱毒和快速繁殖的主要途径。目前，国内外蓝莓组织培养技术的研究己取得一定的成果，国内在带芽茎段诱导和增殖方面的研究报道较多，而国外在对叶片进行直接再生的研究占了较大的比例。我们从带芽茎段诱导增殖、叶片直接再生、瓶内生根、到炼苗各环节就南高丛蓝莓奥尼尔建立了一种适宜于蓝莓苗木的工厂化育苗技术体系，以满足商品基地建设的需要。 

发明内容

针对现有技术存在的缺陷，本发明的目的是提出一种适宜南高丛蓝莓高效快繁技术，组织培养凭借其无性繁殖的独特优势，可以迅速去除病毒和更新品种，保留品种的本来特性，变异性小，并且可在较小空间内和较短时间内快速地获得大量无性系脱毒组培苗，成为蓝莓脱毒和快速繁殖的主要途径，本发明就兔眼蓝莓建立了一种脱毒高速快繁的有效方法。 

本发明的技术方案是： 

一种适宜南高丛蓝莓高效快繁技术，其特征在于， 

a、选材：植物材料为智博生物科技公司种植园种植的南高丛蓝莓品种奥尼尔，外植体材料选用当年生幼嫩枝； 

b、初代培养获得无菌苗：以田间生长的当年生嫩枝为初始外植体，摘除叶片。用洗衣粉水溶液洗净灰尘等污物后，自来水冲洗。转到超净工作台上，先后用75％酒精和0.1％升汞对外植体分别进行50s与10min的表面灭菌，接着用无菌水冲洗4次，2分钟/次，最后用无菌滤纸吸去外植体表面水分，将灭菌后的嫩枝切段形成1-2cm长的单芽茎段，然后放置在初代培养基中培养，诱导侧芽萌发； 

c、继代培养的优化：待单芽茎段的茎段腋芽伸长后，将茎段腋芽切下转接于含有不同浓度激素组合的改良WPM培养基+20g/L蔗糖+8.8g/L日产琼脂粉的增殖培养基(pH＝5.2)中进行光照培养，光照培养条件为：温度25±2℃，光强2500Lx，光周期16h光照/8h黑暗；改良WPM培养基的改良方法是：以Ca(NO₃)₂·4H₂O、KNO₃代替原WPM培养基中的CaCl₂、K₂SO₄； 

d、叶片再生体系的建立：将继代培养2个月的无菌苗植株叶片切下，按垂直叶片主脉离叶尖端的1/3处切下叶片分成叶尖端和叶柄端，将叶尖端、叶柄端和全叶这三部分均背面朝下分开放置接种于不同盐浓度和不同ZT浓度的改良WPS培养基+20g/L蔗糖+9g/L琼脂粉(pH＝5.2)的培养瓶内，每瓶各10片左右，每个处理组重复12瓶。先进行20d的暗培养，暗培养的温度为25±2℃，随后进行光照培养，光照培养条件为：温度25±2℃，光强2500Lx，光周期16h光照/8h黑暗，30d后统计叶片出芽率及每个叶片相应形成的苗数，从而获得最佳的叶片再生体系；