[发明专利]一种苯丙氨酸定量检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种苯丙氨酸定量检测试剂盒，包括苯丙氨酸脱氢酶、辅酶β-NAD、辅酶FMN、长链脂肪醛、FMN-NADH氧化还原酶、细菌荧光素酶、0.05mol/L pH10.0的Gly-NaOH缓冲液、0.1mol/L pH7.0的K₂HPO₄-KH₂PO₄缓冲液。

2.如权利要求1所述的定量检测试剂盒，其特征在于，所述长链脂肪醛为正葵醛。

3.如权利要求1所述的定量检测试剂盒，其特征在于，所述FMN-NADH氧化还原酶和细菌荧光素酶为sigma公司的含细菌荧光素酶的NAD(P)H:FMN-氧化还原酶，其货号为L8507。

4.如权利要求1所述的定量检测试剂盒，其特征在于，还包括BSA。

5.一种苯丙氨酸的定量检测方法，包括如下步骤：

（1）使用0.05mol/L pH10.0的Gly-NaOH缓冲液配制苯丙氨酸脱氢酶溶液、辅酶β-NAD溶液，备用；

（2）向含苯丙氨酸的待测样品中加入步骤（1）所配制的辅酶β-NAD溶液、苯丙氨酸脱氢酶溶液，使苯丙氨酸发生脱氢反应生成苯丙酮酸，同时辅酶β-NAD被还原为β-NADH；

（3）使用0.1mol/L pH7.0的K₂HPO₄-KH₂PO₄缓冲液配制辅酶FMN溶液、长链脂肪醛溶液、FMN-NADH氧化还原酶溶液、细菌荧光素酶溶液，备用；

（4）向步骤（2）所得反应混合物中加入步骤（3）所配制的辅酶FMN溶液、长链脂肪醛溶液、FMN-NADH氧化还原酶溶液和细菌荧光素酶溶液进行发光反应，3-5min内测定相对发光强度，根据校准品苯丙氨酸浓度与相对发光强度之间的线性关系，计算出样本中的苯丙氨酸含量。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述苯丙氨酸脱氢酶在步骤（2）所述反应体系中的终浓度为10~50mIU/L。

7.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述辅酶β-NAD在步骤（2）所述反应体系中的终浓度为0.5~3mmol/L。

8.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述辅酶FMN在步骤（4）所述反应体系中的终浓度为2~10μmol/L。

9.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述长链脂肪醛为正葵醛。

10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述正葵醛在步骤（4）所述反应体系中的终浓度以体积百分比计为0.1%~1%。

11.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，步骤（3）、（4）所述长链脂肪醛溶液还包含BSA。

12.根据权利要求11所述的检测方法，其特征在于，所述BSA在步骤（4）所述反应体系中的质量体积百分比以g/ml计为0.1%～1%。