[发明专利]一种乙型肝炎抗原蛋白的吸附材料及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医疗生物材料，具体涉及的是用于血液净化的乙型肝炎抗原蛋白的吸附材料及其制备方法。

背景技术

乙型病毒感染性肝炎是威胁人类健康的一类常见疾病，传播范围广，危害性大。是如今严重危害我国人民健康的疾病。我国是乙型肝炎高发区，人群总感染率高达60%，构成乙型肝炎传染源的表面抗原携带者约为10%。全国乙型肝炎表面抗原（HBsAg）携带者超过1.3亿，其中约10%最终转化为各种慢性肝炎，最终转化为肝硬化甚至肝癌，给社会带来了巨大的经济负担。目前，对抗乙肝病毒的药物主要是：干扰素、拉米夫定、阿德福韦酯片；这些药品虽然对乙肝病毒复制指标（HBV-DNA）有一定的疗效，但治疗期间产生耐药性，乙肝病毒变异副作用大，转阴后反弹率高，治疗难度极大。由于中国乙肝病毒的状况严重，所以国家已经制定了疫苗注射制度。但研究已表明，很多乙肝病毒具有“免疫逃逸”的性能，即具备感染疫苗接种者的能力。总之，疫苗的应用前景不容乐观。

血液中的毒蛋白是乙型肝炎的主要致病因子。虽然已经有了早期的探索，但仍未定论的是如何特异有效地从血液中清除这些毒蛋白，而又不造成对机体的损害。亲和吸附治疗是血液净化的一种重要方法，其原理是将某一个配体固定在一个稳定无热源的载体上构建成亲和吸附柱，通过体外循环的方式特异性地清除患者血液中的致病因子，净化血液，打破免疫平衡，改善体内微环境，使得免疫系统处于优势，从而达到辅助治疗疾病的目的。目前临床上应用血液净化能够通过特异性地清除机体的自身抗体，治疗自身免疫性疾病、器官移植排斥反应，还有报道通过吸附低密度脂蛋白治疗高胆固醇血症等。此外，利用人源抗体吸附血液中乙肝颗粒的吸附柱也已有报道。新近的研究表明，钠离子牛磺胆酸共转运多肽是乙型肝炎病毒的功能性受体。利用这种多肽对乙肝毒蛋白进行吸附，能够利用血液净化疗法直接从血液中去除致病因子，在治疗过程中不丢失血浆有效成分，不引入异体血浆，从而具有避免交叉感染、无过敏性反应等优点，而且治疗效果明显，一个疗程便能极大改善体内血液微环境，因而具有良好的临床应用前景。

李湛勇和高庆伟等人分别发明了不同的乙型肝炎病毒免疫吸附柱。它们均是利用免疫结合反应对乙肝病毒颗粒进行吸附，但是它们的吸附材料都是以抗体材料作为基础，存在三个不足：1）有引发过敏性反应的生物安全性危险，从而产品的性能不稳定；2）抗体的生产极为繁琐复杂，制备过程步骤较多，因此得到的吸附材料产品批间差异大；3）单纯以抗体作为结合基础无法应对具有“免疫逃逸”性能的乙肝病毒颗粒。然而，用钠离子牛磺胆酸共转运多肽作为吸附基础的净化材料能够极大改善以上三点：1）此人造多肽与人体的天然多肽组成结构和空间构象完全一致，无免疫原性；2）制备简单，生产工艺过程短，能有效质控；3）无“免疫逃逸”效应，适效范围广，应用前景大。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种无免疫原性，吸附效率高并且安全稳定性良好的乙型肝炎毒蛋白吸附材料。

本发明所要解决的另一个问题是提供上述乙型肝炎抗原蛋白吸附材料的制备方法，该方法路线较短、操作简便。

本发明所提供的乙型肝炎抗原蛋白的吸附材料，是琼脂糖凝胶与带标签的人源钠离子牛磺胆酸共转运多肽偶联的高分子材料，具有如下的化学结构：

其中：

代表琼脂糖凝胶，X代表活化偶联基团，Tag为标签多肽，如组氨酸标签或谷胱甘肽标签，NTCP是人源钠离子牛磺胆酸共转运多肽。

琼脂糖凝胶是含有丰富羟基的天然多糖，它可参与不同类型的化学反应使其成为活性基团，能够在活化剂的作用下与多肽标签的羧基端反应。本发明的基本构想是：首先，通过链接标签的方式优化钠离子牛磺胆酸共转运多肽的纯化步骤；然后，利用融合的标签作为延伸的“俘获手臂”使活性配基能够在血浆中充分舒展，增加钠离子牛磺胆酸共转运多肽与乙肝毒蛋白的结合效率；随后，选用化学共价偶联剂作为活化琼脂糖的试剂，将多肽标签的氨基端固定在球珠上，而使得融合蛋白的羧基端，即钠离子牛磺胆酸共转运多肽部分伸展在球珠表面；最终，使得TagNTCP以共价键的方式固定在琼脂糖凝胶上。