[发明专利]eIF3a突变基因及其检测引物、试剂盒、检测方法、pcβa-eIF3a-Arg803Lys突变型质粒

说明书

技术领域

本发明属于医学分子生物学领域，具体涉及eIF3a突变基因及其扩增引物、试剂盒、扩增方法、pcβa-eIF3a-Arg803Lys突变型质粒和该质粒的制备方法。 

背景技术

真核生物翻译调控主要发生在起始阶段，也是翻译的限速阶段。这一过程有10个以上的翻译起始因子(eukaryotic initiation factors，eIFs)参与。eIF3是翻译起始因子中最大，最复杂的一个，它由13个亚基组成，分别命名为eIF3a到eIF3m，它参与翻译起始的所有步骤。首先，参与80S核糖体解离，eIF3可以与40S核糖体亚基结合并形成复合物，从而使其保持解离状态不与60S亚基聚合。第二，eIF3参与了43S翻译起始前复合物的形成，它与40S亚基结合后，协助招募GTP-eIF2-tRNA-methionine三聚复合物。第三，eIF3帮助mRNA与43S翻译起始前复合物结合。此外，它也参与了翻译起始复合物对起始密码子的识别和通过与内部核糖体进入位点(Internal Ribosome Entry Site,IRES)结合参与帽状结构非依赖性翻译起始过程。eIF3a是eIF3最大的亚基，我们前期的研究表明它可以调控一些蛋白的合成，包括α-tubulin、核苷酸还原酶M2(Ribonucleotide Reductase M2,RRM2)和p27等。我们已有的研究证明了eIF3a可以调控一些NER途径的蛋白翻译。 

我们前期的研究中测序筛查到新的SNPs:eIF3a2554G>A，它位于10号染色体外显子（Arg803Lys），导致了有义突变。我们在前期的研究表明，eIF3a可以调控某些细胞周期和增殖分化相关基因的表达。我们试图探讨eIF3a2554G>A基因突变是否能通过调控eIF3a的表达而影响其下游基因的表达。因此需要构建eIF3a2554G>A突变型eIF3a真核表达载体。 

发明内容

本发明旨在克服现有技术的不足，提供eIF3a突变基因及其扩增引物、试剂盒、扩增方法、pcβa-eIF3a-Arg803Lys突变型质粒和该质粒的制备方法。 

为了达到上述目的，本发明提供的技术方案为： 

一种eIF3突变基因，其基因序列如SEQ ID NO.1所示。 

一种检测上述突变基因的试剂盒，所述试剂盒包括如下引物： 

前引物：5’-AGATTTATTCGTAATGCGACT-3’（SEQ ID NO.2）； 

后引物：5’-AGTTTCCCCTGTCTTCATCG-3’（SEQ ID NO.3）。 

试剂盒中其他试剂为常规PCR扩增试剂，测序试剂。 

一种扩增上述突变基因的方法：从质粒pcβa-eIF3a的全长cDNA上扩增出突变基因并测序，pcβa-eIF3a基因序列如SEQ ID NO.7所示；扩增体系为：5×Primer star Buffer20μL，dNTP mix8μL，前引物2μL，后引物2μL，cDNA2μL，Primer STAR1μL，加ddH₂O65μL至终体积100μL；扩增条件为：95℃预变性5min，98℃10s，58℃退火15s，72℃2min共30个循环，72℃总延伸10min；所述前引物和后引物分别如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。 

一种pcβa-eIF3a-Arg438Cys突变型质粒，所述质粒包括eIF3突变基因，所述质粒的核酸序列如SEQ ID NO.4所示。 

一种制备pcβa-eIF3a-Arg803Lys突变型质粒的方法，包括如下步骤： 

（1）从质粒pcβa-eIF3a的全长cDNA上扩增出含2554G>A位点的DNA片段Arg803Lys，pcβa-eIF3a基因序列如SEQ ID NO.7所示；扩增引物为： 

前引物：5’-AGATTTATTCGTAATGCGACT-3’（SEQ ID NO.2）； 

后引物：5’-AGTTTCCCCTGTCTTCATCG-3’（SEQ ID NO.3）；