[发明专利]生产紫杉二烯的酵母菌及构建方法无效
| 申请号： | 201310064250.7 | 申请日： | 2013-02-28 |
| 公开（公告）号： | CN103146729A | 公开（公告）日： | 2013-06-12 |
| 发明（设计）人： | 元英进;贾云婧;丁明珠;闫慧芳 | 申请（专利权）人： | 天津大学 |
| 主分类号： | C12N15/60 | 分类号： | C12N15/60;C12N9/88;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/865 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所 12201 | 代理人： | 陆艺 |
| 地址： | 300072*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 生产 紫杉 酵母菌 构建 方法 | ||
1.一种紫杉二烯合酶基因，其特征是它是序列表SEQ ID NO:11所述的核苷酸序列。
2.权利要求1的一种紫杉二烯合酶基因编码的蛋白质，其特征是它是序列表SEQ ID NO:12所述的氨基酸序列。
3.一种生产紫杉二烯的酵母菌的构建方法，其特征是包括如下步骤：
（1）载体SyBE_001175的构建：
①将启动子、GGPP合酶基因、终止子采用OE-PCR方法拼接起来，得到两端包含HindⅢ和ApaⅠ位点的片段，连接入游离型载体pRS425；
②将启动子、序列表SEQ ID NO:11所示的紫杉二烯合酶基因、终止子采用OE-PCR方法拼接起来，得到两端包含SacⅠ和HindⅢ位点的片段，连接入步骤①获得的载体，得到载体SyBE_001175；
(2)载体SyBE_001187的构建：
①将酵母组成型启动子、tHMGR基因、终止子应用OE-PCR法拼接起来，得到两端包含XhoⅠ和ApaⅠ位点的片段，连接至整合型载体pRS403；
②将酵母组成型启动子、ERG20基因、终止子应用OE-PCR法拼接起来，得到两端包含SacⅠ和XhoⅠ两个位点的片段，连接至步骤①获得的载体，得到载体SyBE_001187；
所述GGPP合酶基因是序列表SEQ ID NO:9所述的核苷酸序列；所述tHMGR基因是序列表SEQ ID NO:3所述的核苷酸序列；所述ERG20基因是序列表SEQ ID NO:7所述的核苷酸序列；
（3）将所述载体SyBE_001175、SyBE_001187导入到酿酒酵母W303-1A或酿酒酵母BY4742中，得到生产紫杉二烯的酵母菌。
4.权利要求3的一种生产紫杉二烯的酵母菌的构建方法构建的酵母菌。
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