[发明专利]生防绿木霉的SCAR标记及其应用和定量检测方法

权利要求书

1.一种生防绿木霉SS161的SCAR标记，其特征在于该标记的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.如权利要求1所述的一种生防绿木霉SS161的SCAR标记在鉴定及跟踪检测生防绿木霉SS161中的应用。

3.一种用于扩增如权利要求1所述的一种生防绿木霉SS161的SCAR标记的引物对，其特征在于该引物对的上游引物TV163F序列如SEQ ID NO：2所示，下游引物TV163R序列如SEQ ID NO：3所示。

4.一种利用生防绿木霉SS161的SCAR标记进行绿木霉SS161定量检测方法，其特征在于包括以下步骤：

1）荧光定量PCR引物和TaqMan探针

根据生防绿木霉SS161的SCAR标记序列，设计荧光定量PCR引物和TaqMan探针，所述的生防绿木霉SS161的SCAR标记序列如SEQ ID NO：1所示，所述的荧光定量PCR引物上游引物Qtv163F序列如SEQ ID NO：4所示，所述的荧光定量PCR引物下游引物Qtv163R序列如SEQ ID NO：5所示，所述的TaqMan探针序列如SEQ ID NO：6所示；

2）PCR反应体系和程序

PCR反应总体系为25μL，其中RealMasterMix Probe系统10μL，荧光定量PCR上下游引物终浓度为200～600nM, TaqMan探针浓度为100～300nM，Probe Enhancer solution 1.25μL, 待测DNA模板0.5～5μL，超纯水补足25μL；

PCR反应程序：95℃ 5min；然后，95℃15S, 60℃30S 共40个循环；

3）结果分析

根据实时定量PCR结果计算采集样品中木霉SCAR标记的拷贝数，木霉SCAR标记的拷贝数反映木霉菌的数量，其拷贝数的变化反映样品中木霉菌数量的变化，根据木霉SCAR标记的拷贝数计算出样品中木霉菌的相对含量，通过监测样品中SCAR标记拷贝数的变化，监测样品中木霉菌的动态变化。