[发明专利]生防绿木霉的SCAR标记及其应用和定量检测方法

说明书

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及生防绿木霉的SCAR标记及其应用和定量检测方法。 

背景技术

木霉菌（Trichoderma spp.）广泛分布于土壤中，是一类重要的生防真菌，在作物土传、种传病害防治上潜力巨大。木霉菌因其在酶、抗生素及生防等方面的重要的经济生产价值而得到世界广泛的研究和关注。自从1932年木霉菌的菌寄生现象被发现以来（Weindling等，1932），关于木霉菌生防特性的研究越来越多。据报道，该属真菌至少对18个属20余种病原真菌和多种病原细菌有拮抗作用，已在世界范围内被成功用于植物病害防治（陈捷等，2011）。迄今为止，已有百余种木霉制剂问世，年销售额高达2.5亿美元，施用区域已及五大洲60多个国家和地区（陈捷等，2011， Lorito et al., 2010）。木霉已经广泛用于蔬菜、花卉、草坪、运动草皮、中药材、果园等经济作物及花生、大豆、棉花等旱作大田作物的土传病害防治上（Ding等，2003；孙虎等，2011；Harman等，2010）。绿木霉SS161是从土壤中分离的一株生防菌株，该菌株对腐霉（Pythium）、绵霉（Achlya）、疫霉（Phytophthora）、镰刀菌（Fusarium）和丝核菌（Rhizoctonia）等常见土传、种传病害的多属病原菌都有较好的抑制效果，其在土传、种传病害防治上潜力巨大、前景广阔。 

SCAR(Sequence—characterized Amplified Region，SCAR）分子标记是在RAPD技术基础上发展起来的一种分子标记技术。SCAR标记是将目标 RAPD 片段进行克隆并对其末端测序，根据 RAPD 片段两端序列设计特异引物，对基因 DNA 片段再进行PCR特异扩增，把与原RAPD片段相对应的单一位点鉴别出来。该标记具有方便、快捷、可靠，可以快速检测大量个体，结果稳定性好，重现性高等优点,被广泛用于分子标记辅助选择、基因连锁定位、高密度遗传图谱构建、植物品种和菌种鉴别等方面。 

生防菌株能否取得成功，其对施用环境的生态适应能力是关键因素之一。一些生防菌株室内试验防效显著，而应用到田间却效果不甚理想，往往就是因为生防菌株无法适应田间环境造成生防菌株无法定殖。木霉多施于土壤用以土传病害的防治，而土壤生态系统自我修复能力很强，人为引入的微生物往往会因为无法存活，而数量锐减直至最终消失（Cook和Baker , 1983）。作为一种活体微生物制剂，木霉必须要在土壤和根际环境中很好地定殖，才能起到防治土传病害的作用。因此，木霉对土壤环境和根际环境的生态适应性是评价其生防性能的重要指标(Harman等,2004)，而种群数量动态是木霉对该环境的生态适应性的直接体现。掌握土壤中木霉的种群动态规律，可作为把握施用木霉时机、剂量的依据，为木霉防治策略的制定提供指导，可以提高木霉的生防效率。