[发明专利]抗GFAP单克隆抗体可变区序列及其制备方法

权利要求书

1.抗GFAP单克隆抗体可变区序列，其特征在于，包含两种核苷酸序列，所述核苷酸序列分别为CM10330-VH和CM10330-VL。

2.根据权利要求1所述的抗GFAP单克隆抗体可变区序列，其特征在于，所述核苷酸序列CM10330-VH和CM10330-VL由保藏号为180CT3.1.5的杂交瘤细胞株制备而成。

3.根据权利要求1所述的抗GFAP单克隆抗体可变区序列，其特征在于，所述CM10330-VH编码114个氨基酸，分子量为12651D，其中CDR1、CDR2 和 CDR3 的区域相应地分别为 26aa-33aa， 51aa-58aa 和 97aa-103aa。

4.根据权利要求1所述的抗GFAP单克隆抗体可变区序列，其特征在于，所述CM10330-VL编码108个氨基酸，分子量为12101D，其中CDR1、CDR2 和 CDR3 的区域相应地分别为27aa-32aa，50aa-52aa 和 89aa-97aa。

5.根据权利要求1所述的抗GFAP单克隆抗体可变区序列，其特征在于，还包括：与上述两种核苷酸序列具有相同氨基酸序列产物的核苷酸序列。

6.根据权利要求5所述的抗GFAP单克隆抗体可变区序列，其特征在于，还包括：经过一个或者几个碱基替换、缺失或添加后仍具有与所述核苷酸序列产生的氨基酸序列具有相同活性的核苷酸序列。

7.制备权利要求1至6任意一项所述的抗GFAP单克隆抗体可变区序列的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）杂交瘤细胞的制备：首先用GFAP蛋白抗原免疫雌性健康的BALB/c小鼠，挑选出免疫后抗体表达呈阳性的小鼠，取其脾脏细胞，然后将分离的小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞；

（2）单克隆细胞的筛选：将上述杂交瘤细胞在HAT培养基中培养，对ELISA检测呈阳性的单克隆细胞进行ELISA复筛，然后将筛选出的ELISA阳性单克隆细胞进行WB复筛，再将WB阳性细胞进行亚克隆，经过2次亚克隆，筛选出能够稳定分泌抗体的单克隆细胞，将阳性的单克隆细胞扩大培养后定株、冻存；

（3）杂交瘤细胞抗GFAP单克隆抗体的获得：首先鉴定步骤（2）所制备的单克隆细胞的亚类亚型，然后将阳性的单克隆细胞注射到小鼠体内进行腹水生产，再将产生的腹水通过层析纯化后得到抗GFAP单克隆抗体；

（4）抗GFAP单克隆抗体重链和轻链可变区基因的克隆：提取步骤（3）中所用的单克隆细胞的总RNA，以总RNA中的mRNA为模板，反转录得到cDNA，最后克隆得到抗GFAP单克隆抗体的重链可变区和轻链可变区。