[发明专利]一种检测早期非小细胞肺癌多位点关联基因的试剂盒

权利要求书

1.一种检测早期非小细胞肺癌多位点关联基因的引物，其特征在于：所述的引物的核苷酸碱基序列如序列表中SEQ ID No：1、SEQ ID No：2、SEQ ID No：6、SEQ ID No：7、SEQ ID No：11、SEQ ID No：12、SEQ IDNo：16、SEQ ID No：17所示。

2.一种检测早期非小细胞肺癌多位点关联基因的探针，其特征在于：所述的探针的包括5’端探针和3’端探针；所述的5’端探针的核苷酸碱基序列如序列表中SEQ ID No：3、SEQ ID No：4、SEQ ID No：8、SEQ ID No：9、SEQ ID No：13、SEQ ID No：14、SEQ ID No：18、SEQ ID No：19所示；所述的3’端探针的核苷酸碱基序列如序列表中SEQ ID No：5、SEQ ID No：10、SEQ ID No：15、SEQ ID No：20所示，所述的3’端探针的核苷酸碱基序列的5’端添加磷酸修饰，3’端加入荧光修饰。

3.一种检测早期非小细胞肺癌多位点关联基因的试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒包括由A体系、和B体系；

所述的A体系包括：PCR镁离子缓冲液[2.5mmol/L MgCl₂，500mmol/LKCL,100mmol/L Tris-Cl(PH8.3)]，dNTP，Taq DNA聚合酶、引物、ddH2O；

所述的PCR镁离子缓冲液中镁离子浓度是2.5mM，所述的Taq DNA聚合酶浓度是2.5unit/μl；

所述的B体系包括：1×连接酶缓冲液[10Mm Tris-CL(PH8.0),NaCl3mol/L,60mmol/L MgCl₂]，dNTP，Taq DNA连接酶、探针，ddH2O；所述的探针包括3’端探针和5’端探针；

所述的1×连接酶缓冲液的浓度是5mM，所述的Taq DNA连接酶浓度是2.5unit/μl。

4.一种检测早期非小细胞肺癌多位点关联基因的试剂盒的制备方法，其特征在于：

所述的试剂盒包括由A体系、和B体系；

所述的A体系包括：PCR镁离子缓冲液[2.5mmol/L MgCl₂，500mmol/L KCL,100mmol/L Tris-Cl(PH8.3)]，dNTP，Taq DNA聚合酶、引物、ddH2O；

所述的PCR镁离子缓冲液中镁离子浓度是2.5mM，所述的Taq DNA聚合酶浓度是2.5unit/μl；

所述的B体系包括：1×连接酶缓冲液[10Mm Tris-CL(PH8.0),NaCl3mol/L,60mmol/L MgCl₂]，dNTP，Taq DNA连接酶、探针，ddH2O；所述的探针包括3’端探针和5’端探针；

所述的1×连接酶缓冲液的浓度是5mM，所述的Taq DNA连接酶浓度是2.5unit/μl；

所述的制备方法包括以下步骤：

A、采用引物设计软件设计所述的引物，Tm值分别为55摄氏度、50摄氏度、60摄氏度、62摄氏度；再合成所述的引物；

B、采用探针设计设计所述的探针，再进行合成和修饰，得到所述的探针；

C、分别配制：A体系中的PCR镁离子缓冲液[2.5mmol/L MgCl₂，500mmol/L KCL,100mmol/L Tris-Cl(PH8.3)]、dNTP、Taq DNA聚合酶；B体系中的1×连接酶缓冲液[10Mm Tris-CL(PH8.0),NaCl3mol/L,60mmol/L MgCl₂]、dNTP、Taq DNA连接酶；

D、将所述的A体系、B体系进行分装处理，得到所述的试剂盒。